Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL

Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL
产品及特点Klenow 片段是大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物。它保留了 DNA 聚合酶活性，具有 3’→ 5’外切酶活性，但不具有 5´→3´ 外切核酸酶活性。可 以在 DNA 模板和引物存在的条件下，选择性地催化底物 dNTP 沿 5’→ 3’方向 合成与模板互补的 DNA。本产品是重组表达得到，它具体有下列用途：

1. 双链 DNA5’突出末端的平滑化。

2. 用随机引物制备探针。

3. 随机引物标记法。

4. 寡核苷酸定向诱变（Oligonucleotide directed mutagenesis）中双链 DNA 的合成。 5. 双脱氧法 DNA 序列测定（Sanger 法）。
Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL
规格及成分 成 份 编号 200U 塑料袋包装
Klenow 片段（5U/uL） 131015A 20 uL
10×Klenow Fragment Buffer 131015B 1 mL
使用手册 1 份
活性定义： 以合成的 Poly d(A-T) DNA 为模板/引物，在 37℃、pH7.4 的条件下，30 分钟内使 10 nmol 的全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为 1 个活性单位(unit)。
活性定义反应液：67mM 磷酸钾、pH7.4、6.7 mM MgCl2、0.1mM DTT、20uMDNA 模板、33 uM dATP，33uM【3H】dTTP纯度：
1. 10 units 的本产品和 1 μg 的超螺旋 pBR322 DNA(Form I)在 37℃下反应 1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。
2. SDS-PAGE：＞95%。酶储存 buffer：50 mM 磷酸钾，pH 6.5，1 mM DTT，50%甘油10×Klenow Fragment Buffer： 100 mM Tris-HCl，pH7.5、70 mM MgCl2、1 mM DTT。注意：本 buffer 可用于标记或末端平化等常规实验，与活性定义所用的 buffer 组成不同。

Klenow片段（3′→5′exo-），5U/uL运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 模板 DNA；引物

使用方法 使用举例：随机引物的同位素标记反应

1. 在微量离心管中配制下列反应液

2. 95℃保温 3 分钟。然后冰中急冷 5 分钟。

3. 加入 2.5 μl 10×Klenow Fragment Buffer。

4. 加入 2.5 μl dNTP (0.2 mM dATP,dGTP,dTTP)。

5. 加入 5 μl 111 TBq/mmol [α32P].dCTP3000 Ci/mmol)(1.85 MBq, 50μCi)

6. 加入 1 μl 本产品，反应液共 25 μl。

7. 37℃反应 3 小时。

65℃加热 5 分钟。反应液可直接作为探针使用。如有必要，可以通过用

柱式探针纯化试剂盒除去未反应的标记的 dCTP。