大肠杆菌DH10B化学感受态细胞

大肠杆菌DH10B化学感受态细胞

产品及特点本产品是采用大肠杆菌 DH10B 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可直接用于 DNA 的化学转化。本试剂盒具有下列特点：

1. 使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，-80℃保存几个月转化效率不改变。

2. 可用于高效转化 150Kb 大小的质粒，可用于蓝、白斑筛选。

3. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

4. DH10B 菌株基因型是 F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λrpsLnupG。

其基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号 含义K-12

K-12系的所有菌种默认都携带F因子和?、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，其产物可对甲基化的CG切割。F

? 本菌种缺失F因子

?? 本菌种缺失?原噬菌体

araD139 不能代谢阿拉伯糖

△(ara-leu)7697 不能自身合成亮氨酸

endA1 核酸内切酶 I 缺失

??80lacZ?M15]

?80原噬菌体上携带lacZ?M15，其编码?-半乳糖苷

酶基因?片段，与携带?片段的质粒互补可恢复酶

活性，用于蓝白斑筛选

galE15

UDP-半乳糖-4-差向异构酶失活，不能利用半乳

糖，对 2 脱氧半乳糖抗性，LPS 合成缺失，转化

效率高

galK16

半乳糖激酶失活，不能利用半乳糖，对 2 脱氧半

乳糖抗性

△lacX74 lac操纵子和邻近区域缺失，不能代谢乳糖

mcrA

在此菌种中，e14原噬菌体携带的mcrA基因缺

失，故不能对甲基化的CG切割

△(mrr–

hsdRMS-mcrBC)

缺失对甲基化C的限制、缺失EcoK修饰限制系

统，缺失对甲基化A的限制

nupG

同deoR，核苷酸转运突变，使得细胞组成型合成

核苷酸，用于质粒制备

recA1

ATP依赖型重组酶失活，recBCD、recE和recF

三条重组路径均复丧失，重组率降低1万倍。适合

扩增有回文结构的高拷贝质粒

rpsL 30S核糖体S12突变，导致对链霉素抗性

规格及成分 成分 编号 小扁盒包装

大肠杆菌 DH10B 化学感受态细胞 140374 0.1 mL×10

使用手册 140374sc 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法 1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根

据实际情况分装使用。

以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于

37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布

平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克数较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液

再涂布新培养基进行培养。