大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞

大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞

产品及特点本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞，适用于昆虫杆状 病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株，用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测， 本产品转化效率可达 107CFU/μg。

DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本 Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。 辅助质粒包含 tns ABCD 区域，该区域提供了 mini-Tn7 从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶 位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual 等） 含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和 Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒 多角体基因启动子、多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后，发生重组后就可产生重组 Bacmid，提取纯化重组 Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 或 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外，DH10Bac 细胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组 bacmid 的蓝白斑筛选。

菌株基因型为：F - mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λrpsL nupG/pMON14272/pMON7124
规格及成分 成分 编号 包装
本产品 140576 0.1 mL×10
使用手册 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，避免反复冻融，有效期半年。

自备试剂 重组质粒、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 制备含 有如 下抗生 素的 LB 固 体平板 ：50 μ g/mL Kanamycin ，7 μ g/mL gentamicin，10 μg/mL tetracycline，100 μg/mL X-gal，40 μg/mL IPTG。

2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL，可以根据 实际情况分装使用。 以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。 3. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入 1-10 ng 重组质粒，用移液器轻轻吹 打混匀，冰浴 30 分钟。

4. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

5. 每个离心管中加入 900 μL 无菌的 SOC（不含抗生素），混匀后置于 37℃ 摇床， 200rpm 振荡培养 4 小时。

6. 用 SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释，如分成 3 个稀释梯度 10-1 ,10-2 ,10-3。

7. 取 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板， 37℃培养 24-48 小时。

8. 保留剩余的菌液保存于 4℃，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再 涂布新培养基进行培养。