SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

货号：PN1200

规格：25T/50T

保存：2-8℃，避光，有效期1年。

产品组成：

*使用前按每克PAGE胶凝固剂加蒸馏水10mL配置成10%溶液，并分装成小体积后冻存于-20℃。

*检测SDS溶液是否澄清，若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解，不影响效果。

产品说明：

本产品包括SDS-PAGE凝胶制备所需的全套试剂，客户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶) ，方便、快捷、实惠。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒约可配制25/50块常规大小的PAGE胶。

操作步骤(仅供参考)：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶浓度，凝胶浓度见附表1。

一、灌制分离胶（各试剂使用量见附表3）

1、参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。

注：上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触，是否加入上层筛板可根据实际情况选择。

2、将不同体积的30%Acr/Bis(29:1)、1.5mol/L Tris(pH8.8)、10%SDS和双蒸水在烧杯或试管中混合。

3、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层，使凝胶表面保持平整。）

5、静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，表面凝胶已聚合。

二、灌制浓缩胶（各试剂使用量见附表2）

1、去除覆盖在分离胶上的水层。

2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、1.0mol/L Tris(pH6.8)、10%SDS和纯水在小烧杯或试管中混合。

3、加入10%PAGE胶凝固剂和PAGE胶促凝剂，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

5、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。静置10~20分钟，等待浓缩胶聚合。

7、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

8、进行常规电泳操作。

附表

附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与分离范围

附表2. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶

附表3. 配制SDS-PAGE分离胶

注意事项：

1、10%PAGE胶凝固剂配制后分装-20℃保存。10%PAGE胶凝固剂溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的PAGE胶凝固剂溶液。

2、10%SDS在低温情况下容易析出，配置之前请确保10%SDS溶液澄清透明。若有析出，可37℃水浴溶解后使用。

3、PAGE胶促凝剂易挥发，使用后请盖紧瓶盖。

4、PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及PAGE胶凝固剂、PAGE胶促凝剂的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变PAGE胶凝固剂及PAGE胶促凝剂的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的PAGE胶凝固剂、PAGE胶促凝剂的用量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整。

5、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

6、在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。