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通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒

Universal RT-LAMP Kit
1790 50次 起订
上海 更新日期:2024-11-22

上海泽叶生物科技有限公司

VIP5年
联系人:宛双凤
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邮箱:sale1@shzysw.net

产品详情:

中文名称:
通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒
英文名称:
Universal RT-LAMP Kit
保存条件:
常温运输和保存
纯度规格:
99.99%
产品类别:
分子生物学 核酸扩增

通用型RT-LAMP恒温扩增试剂盒

 

产品及特点 本 试 剂 盒 可 以 用 于 RT-LAMP 等 温 扩 增 , RT-LAMP 即 逆转录和Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增)的结合,专门用于快速扩增 RNA。LAMP 是 2000 年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用 4 或 6 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的 DNA 聚合酶,在等温条件下(63℃左右) 30-60 分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 RT-PCR 技术,同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程,不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。本试剂盒即根据 LAMP 原理开发,它具有下列特点:

1. 整合了所有成分为 2×RT-LAMP Mix,不需要单个准备各成分。RT 和LAMP 一管式操作,方便快捷,减少污染。

2. 高特异性,由于同时使用 4-6 条特异引物,所以特异性比 RT-PCR 更高。

3. 高扩增效率,扩增效率可达到 10E9-10E10,比 PCR 灵敏 10 倍,好时可检测到单拷贝的 RNA 分子

4. 65℃左右恒温下完成 RT 和 LAMP 扩增,不需要贵重的热循环仪。。

5. 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。

6. 本产品足够 50 次 20uL 体系的 RT-LAMP 扩增,本产品限于科研使用。
规格及成分 成 份 编 号 塑料袋包装
2×RT-LAMP Mix 101114a 500 uL(白盖)
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 130923a 45 uL(黄盖)
使用手册 101114sc 1 份

运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。

自备试剂 RNA 模板及 LAMP 引物(4 或 6 条)

使用方法

 1. 配制自备的5×LAMP引物混合液。先加超纯水将自备的下列6种(或4种)引物干粉稀释到母液浓度(见下表),然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物和超纯水,后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL,则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。1mL的5×LAMP引物混合液足够250次20uL体积的LAMP或

RT-LAMP扩增。引物名称 母液浓度 加入母液量 在 5×LAMP 引物

混合液中的浓度

自备 FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

自备 BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

自备 F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

自备 B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

自备 Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

自备 Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超纯水 780 uL

合计 1000uL

2. 在冰上融化各组份后轻柔混匀,按下表在PCR反应管中设置反应,如果有N个样品,则需要设置N+2个反应,多的两个一个是阳性对照,一个是阴性对照:

成份 N 个样品管 阴性对照管 阳性对照管

2×RT-LAMP Mix 各 10 uL 10 uL 10 uL

自备 5×LAMP 引物混合液 各 4 uL 4 uL

自备 RNA 模板 各 1-100ng -

LAMP 阳性对照模板-引物

混合物

- - 4.5

补自备超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL

注:如果在此步少加1 uL水,然后加入自备的可视化染料(本公司有相关产品,

编号为130833,可到www.tiandz.com了解),则反应后可直接肉眼判断

LAMP扩增是否成功。

3. 混匀,置于63℃保温60分钟。注意:如果不使用Loop引物,则好保温120分钟;如果使用Loop引物,则好保温60分钟。

4. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。BstDNA聚合酶有外切酶活性,所以必须灭活,否则它可能会逐渐降解DNA扩增产物。

5. 产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检测:

1) 如果已经加入LAMP可见光染料,则直接肉眼观察。判断标准见上。

2) 琼脂糖凝胶电泳:取LAMP扩增产物5uL在1-2%的琼脂糖凝胶上进行电泳,如果有扩增将可见LAMP特征性梯状电泳图谱;

3) 向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料(产品编号70909,另售)1 uL,混匀,稍离心。如果颜色同阴性对照呈现淡黄色,则无扩增。如果同阳性对照呈现淡绿色,表示有LAMP扩增。也可在加入PCR级绿如蓝染料后将反应管在300nm的紫外线下观察,如果颜色同阴性对照呈现弱荧光,则无扩增。如果同阳性对照呈现强荧光,表示有LAMP扩增。

6. 结果分析:

1) 如果阳性对照有扩增,阴性对照没有扩增,则样品数据才有效,否则实验失败,不需要分析数据。

2) 如果阳性对照没有扩增,说明试剂盒有问题,请速跟厂家联系。

3) 如果阴性对照有扩增,说明有污染(过去的扩增产物污染了阴性样品),必须重新设计新的针对不同靶位点的LAMP引物,并且严格注意操作的规范性。

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公司简介

上海泽叶生物科技有限公司是一家服务于生命科学领域的高新技术企业,主要为科研机构、高校、院所及企业产品开发研究提供所需要的科研类试剂、耗材、仪器、技术服务等。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学、材料科学,通用试剂、药物合成试剂、手性化合物、催化剂及配体、分析试剂、生物试剂,检测试剂等等

成立日期 (9年)
注册资本 100万元整
员工人数 1-10人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 贸易,试剂,定制,服务
主营行业 生物化工,有机原料,化学试剂,医药原料,技术服务

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