可视化LAMP直接扩增试剂盒

产品及特点 本试剂盒是本公司通用型 LAMP 试剂盒的基础上开发的免 DNA 提取可视化LAMP 试剂盒，它有下列特点：

1. 不需要专门提取 DNA，直接用细胞裂解将液进行 LAMP，极大缩短了实验。

2. 适用于病毒、细菌、真菌、植物、动物的各种形式的样品，包括实体组织、液体样品。

3. 使用 2×可视化 LAMP MagicMix，可视化肉眼检测实验结果。

4. 使用改良的 WarmStart Bst DNA 聚合酶，反应特异性更强。

5. 高扩增效率更高，扩增效率可达到 10E9-10E10，比 PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的 DNA 分子。

6. 本试剂盒足够 50 次 20uL 体系的免 DNA 提取 LAMP 扩增。

7. 本产品只能用于科研目的。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
免 DNA 提取溶液 A 成分一 130985a1 100 uL
免 DNA 提取溶液 A 成分二 130985a2 200 uL
免 DNA 提取溶液 B 130985b 1 mL
2×可视化 LAMP MagicMix 180601a 500 uL
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 180601b 50 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 180601sc 1 份

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 LAMP 样品及 LAMP 引物

使用方法

 1. 配制免 DNA 提取溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足够 10 个样品）为例：在一干净塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超纯水，充分混合均匀即得 1mL 溶液 A 工作液。一次检测一个样品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足够 10 个样品。没用完的工作液可室温放置，但在一周内用完，不要长期放置。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液 A 工作液的体积需要做相应的调整。

2. 根据材料不同参考下表取少量样品到一干净的塑料离心管中。

样品种类 取用量

动物组织 1-5 mg

鼠尾 2mm 长

血液样品 不超过 20 uL

植物叶片 1-5 mg

植物种子（去皮） 1-5 mg

酵母培养物 0.2-0.5mL 培养物沉淀

细菌培养物 0.2-0.5mL 培养物沉淀

注意：未列出样品，用户需要自己摸索用量。对富含多醌多酚的植物材料（如

棉花），组织使用量不要超过 0.5mg。

3. 加入 100 uL 溶液 A 工作液，确保样品被溶液淹埋。

4. 95℃保温 10 分钟。

5. 待冷却到常温后加入 10uL 溶液 B 并混匀得细胞裂解液，放冰上待用。如果暂时不用，可以放-20℃长期保存。

6. 配制自备的 5×LAMP 引物混合液。

先加超纯水（不要用 TE）将各引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的 5×LAMP 引物混合液体积大于或小于 1mL，则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置 2 年。引物名称 母液浓度 加入量 在混合液中浓度

FIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

BIP 引物 100 uM 80 uL 8 uM

F3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

B3 引物 100 uM 10 uL 1 uM

Loop F 100 uM 20 uL 2 uM

Loop B 100 uM 20 uL 2 uM

超纯水 780 uL

7. 在新的塑料管中设置 LAMP 反应（以一个样品为例）：成份 样品管 阳性对照 阴性对照2×可视化 LAMP Mix 10 uL 10 uL 10 uL自备 5×LAMP 引物混合液 4 uL - 4 uL细胞裂解液 1-2 uL - -

LAMP 阳性对照模板-引物混合物 - 4 uL -

补超纯水到 20 uL 20 uL 20 uL

8. 混匀，此时反应液呈现淡紫色。置于 60-65℃保温 60-120 分钟（具体温度根据 LAMP 引物的 Tm 值决定）。如果是在 PCR 仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴保温，没有热盖，建议覆盖 50uL 石蜡油，否则保温期反应体系的水分会蒸发，影响反应效率。

9. 80℃10 分钟灭活 Bst DNA 聚合酶。

10. 如果有阳性扩增，则反应液将变成淡蓝色，如果没有阳性扩增，反应液将还是淡紫色。标准的反应结果如下图（左边 6 个为阳性，右边 2 个为阴性）：

11. 电泳确认：取扩增产物 5 uL 直接在 2%的琼脂糖凝胶电泳（不需要再加上样液），可见 LAMP 特征性电泳图谱。电泳需要打开反应管的盖子，释放出的气溶胶非常容易污染实验环境，为下次扩增带来假阳性，所以一定要在隔离的地方进行电泳分析。

12. 结果分析：如果阳性对照能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照有扩增出条带，则说明 LAMP 样品或试剂有扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，重新设计引物扩增新的靶片段。