糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）

糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）
产品及特点本产品为在 PAGE 凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试 剂盒。该方法使用三种试剂，所需时间仅需不到两小时，而其他的染色方法需 要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色。它有 如下特点：

1. 一站式，包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白，用户不要单独配制 所需成分，简单快捷。

2. 通过共价修饰方式检测糖基，不检测蛋白部分。

3. 灵敏度一般可以达到微克级别，但实际灵敏度跟靶蛋白糖基化程度相关。

4. 可以用于 SDS-PAGE 和 2D 电泳的凝胶检测，也可以用于琼脂糖凝胶电 泳的检测（但背景较高），还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。

5. 本产品足够染色 10 张 mini-PAGE 胶或 20 张 8×8cm 的蛋白印迹纤维 素膜。
糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）
规格及成分 成份 编号 大纸盒包装
氧化试剂 131075a 2.5 g（棕色管）
糖蛋白染色试剂 131075b 250 mL（棕色瓶）
还原试剂 131075c 1.25 g
阳性对照（辣根过氧化物酶） 131075d 1 mg（棕色管）
阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂） 131075e 1 mg（棕色管）
250mL 塑料瓶（空） - 2 个
使用手册 131075sc 1 份

糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）运输及保存 常温运输和保存，但阳性对照和阴性对照干粉需要 4℃或更低温度长期保存， 有效期一年，但糖蛋白染色试剂的有效期只有半年（从出厂时间开始计算）。

自备试剂 甲醇、冰醋酸、超纯水、1×SDS-PAGE 上样缓冲液等

使用方法 实验前

使用方法 实验前准备

1. 配制 3%醋酸溶液：将 30 mL 自备的冰醋酸与 970 mL 超纯水混匀，室 温保存备用。

2. 配制 50%甲醇溶液：将 250 mL 甲醇与 250 mL 超纯水混匀，室温保存 备用。

3. 配制氧化试剂溶液：将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的 3%醋酸溶液（第 1 步配制）， 充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。

4. 配制还原试剂溶液：将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供 的 250mL 空塑料瓶中，然后加入 250 mL 的超纯水，充分混匀溶解后得 到还原试剂溶液，室温保存备用。

5. 配制阳性对照（辣根过氧化物酶）溶液：向装有 1 mg 辣根过氧化物酶固 体的棕色管中加入 1 mL 1×SDS-PAGE 上样缓冲液（自备），所得辣 根过氧化物酶溶液的浓度即为 1mg/mL，然后分装成 100uL/管共 10 管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于 80 mm×80 mm 的凝胶来说，每条泳道加 10 μL 的阳性对照溶液即可。

6. 配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）溶液：向装有 1 mg 大豆胰蛋白酶 抑制剂干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上样缓冲液（自备），所得大豆 胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度即为 1 mg/mL，然后分装成 100uL/管共 10 管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于 80 mm×80 mm 的凝胶来说，每个泳道加 10 μL 的阴性对照溶液即可。

7. 样品稀释：用 SDS-PAGE 上样缓冲液将样品浓度稀释为 1mg/mL， SDS-PAGE 上样缓冲液终浓度为 1×。对于 80 mm×80 mm 的凝胶来 说，每个泳道加 10μL 的样品。 凝胶染色的操作步骤（注意:请在通风橱中进行以下操作）

8. 取出电泳后的 SDS-PAGE 凝胶，加入到装有 100mL 50%甲醇溶液的器 皿中，完全浸泡 30 分钟后，倒出甲醇溶液。

9. 用 100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡 10 分钟。

10. 将胶块转移到装有 25mL 氧化试剂的器皿中，轻轻振荡 15 分钟。

11. 用 100mL 3%醋酸溶液洗涤胶块 3 次，每次轻轻振荡 5 分钟。

12. 将胶块转移到装有 25mL 糖蛋白染色试剂的器皿中，轻轻振荡 15 分钟。 （注：若染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。）

13. 将胶块转移到装有 25mL 还原试剂的器皿中，轻轻振荡 5 分钟。

14. 用 3%醋酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品 红条带。胶块保存在 3%醋酸溶液中。

硝化纤维素膜染色的操作步骤（注意:请在通风橱中进行以下操作）

1. 用 20mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡 10 分钟。

2. 将膜转移到 10mL 的氧化试剂中，轻轻振荡 15 分钟。

3. 用 10mL 3%醋酸溶液洗涤膜 3 次，每次轻轻振荡 5 分钟。

4. 将膜转移到 10mL 的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡 15 分钟。（注：若染 色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解 晶体。）

5. 将膜转移到 10 mL 还原试剂中，轻轻振荡 5 分钟。

6. 用 3%醋酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红 条带。膜可保存在 3%醋酸溶液中。

7. 检测后如果没有条带，可以用转膜后的 PAGE 胶进行检测，因为糖蛋白 （尤其是高度糖基化的蛋白）转膜效果比较差。