改良Lowry法蛋白定量试剂盒

改良Lowry法蛋白定量试剂盒
产品及特点Folin 酚试剂（磷钼酸和磷钨酸混合物）跟蛋白质中含酚氨基酸（色氨酸和酪氨酸）发生颜色反应，可用于测定蛋白质浓度，但灵敏度较低。Lowry在此基础上加入 Biuret（双缩脲）反应步骤，即先在碱性条件下使蛋白质和Cu+形成复合物，再使其与 Folin 酚试剂发生显色反应，产物在 750nm 检测。Lowry 法使不含酚的蛋白质也能被检测出来，灵敏度是单独使用 Folin 酚的10 倍左右，是双缩脲反应的 200 倍，因此成为早期检测蛋白浓度的主要方法。Lowry 检测原理图如下：传统 Lowry 法受到很多常用的试剂（如 DTT、糖、甘油、Triton 等）干扰，步骤繁琐。本公司对 Lowry 法进行改良，具有下列特点:

1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。

2. 能抵抗部分干扰物（如一定浓度 SDS 或其他去污剂）的干扰。

3. 检测线性范围广，在 2-100 µg，检测上限比经典 Lowry 法高 30%-40%。
改良Lowry法蛋白定量试剂盒
规格及成分 成份 编号 1000 次包装
溶液 A 成分一 101102A1 208 mL
溶液 A 成分二 101102A2 16 mL
溶液 A 成分三 101102A3 16 mL
溶液 B 101102B 80 mL
溶液 C 101102C 80 mL
福林酚 100939 10 mL（用 100 mL 棕色瓶）
BSA 标准品
（2 mg/mL in 水） 101102D 1 mL
使用手册 1 份

改良Lowry法蛋白定量试剂盒运输及保存 常温运输和保存（但 BSA 标准品需要-20℃保存），有效期一年。

自备试剂 去离子水、蛋白样品、样品缓冲液

使用方法 一：准备工作

1、 制备溶液 A：将 16 mL 溶液 A 成分二和 16 mL 溶液 A 成分三加入到装液 A 成分一的塑料瓶中，混合均匀得到 240 mL 溶液 A。注意：溶液 A各成分分开提供更加稳定。

2、 制备 Lowry 工作液：将溶液 A、溶液 B 和溶液 C 按 3：1：1 的体积比混合得到 Lowry 工作液。此工作液可以室温放置 2-3 周，所以用多少配多少。如果发现溶液 B 或溶液 C 有沉淀，需 37℃溶解并摇匀后再使用。

3、 制备福林酚工作液：在装有 10 mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入 90 mL 去离子水，摇晃混匀待用。此工作液在避光条件下可以放置 6 个月。

二：试管法

4、 先用去离子水将 BSA 标准（2 mg/mL）稀释到 50 ug/mL，然后在标记的试管中加入下列成分（单位：uL）。注意：每个样品做三个稀释度，每个稀释度设置三次重复，阴性对照和标准品也做三次重复。

标准品（每个做三次重复，此处只列出一个）

编号 BSA 标准

（50 ug/mL） 水 总体积

阴性对照 0 0 200

1 0 200 200

2 25 175 200

3 50 150 200

4 100 100 200

5 150 50 200

6 200 0 200

样品（以 1 个样品、3 个稀释度为例，每个稀释度三个重复，

此处只列出一个）

编号 样品 总体积

1 200 （稀释度 1） 200

阴性对照 1

200（用稀释度 1 稀释的溶解蛋

白样品的缓冲液） 200

2 200 （稀释度 2） 200

阴性对照 2

200（用稀释度 2 稀释的溶解蛋

白样品的缓冲液） 200

3 200 （稀释度 3） 200

阴性对照 3 200（用稀释度 3 稀释的溶解蛋

白样品的缓冲液） 200

5、 每管中加入 200 uL Lowry 工作液，振荡混匀后室温反应 10 分钟。

6、 每管中加入 100 uL 福林酚工作液，振荡混匀后室温反应 30 分钟。

7、 用容量为 0.5 mL、光径为 1 cm 的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯测定 750nm 的光吸收。测定时，先空白（即阴性对照）后样品，测定样品和 BSA标准品时，先低浓度后高浓度。测定未知样品前需要将杯子清洗干净，必要时可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。

8、 根据标准品三个重复的平均值绘制标准曲线，然后根据未知样品的光吸收从标准曲线中查得其对应的浓度。

三：96 微孔板法

9、 同上，只是反应用 96 微孔板设置，用酶标测试仪 750 nm 测定光吸收。

四、样品中干扰物质的去除（本产品不含相关产品，如果样品中有干扰 Lowry 法蛋白定量的物质（见附表），可另购本公司的微量蛋白质沉淀试剂盒（CAT#:81217-50）去除，也可以用自备试剂按下法去除：用水将样品调到体积为 200 uL, 加入 20 uL 0.15%去氧胆酸钠，混匀，室温放置 10 分钟。加入 20 uL 72%的 TCA，室温放置 5 分钟。3000 g 离心

15 分钟，小心去除上清。用 200 ul 水溶解蛋白沉淀后以用于 Lowry 法测定。附：常见 Lowry 法蛋白定量干扰物（低于所列浓度不干扰，高于所列浓度则会干扰，需要按上法去除。不能含任何浓度的 DTE，DTT 和硫酸胺)。干扰物 浓度 干扰物 浓度

Acetone 10% 2-Mercaptoethanol 1 mM

Aprotinin 10 mg/mL NaCl 1 M

CHAPS 0.05% NaOH 100 mM

DMF 10% NaPi 100 mM

DMSO 10% NP40 0.02%

EDTA 1 mM PMSF 1 mM

EGTA 1 mM SDS 1%

Ethanol 10% Sodium Citrate 100 mM

Glucose 100 mM Sucrose 7%

Glycin 100 mM Tris 10 mM

HEPES 1 mM Trition X-100 0.03%

Imidazole 25 mM Tween 20 0.05%

Methanol 10% Urea 3M