TdT加尾法DNA探针地高辛标记试剂盒

TdT加尾法DNA探针地高辛标记试剂盒

原理及特点本产品是基于 TdT 末端转移酶能够在 DNA 的 3’端添加 dNTP 尾巴的 原理而设计，该反应的示意图如下： 本产品是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：

1. 快速，15 分钟即可完成标记反应。

2. 不但可用于单链 DNA 和 DNA Oligo 标记，还可用于 3’突出的双链 DNA 标记，但后者标记效率稍低。

3. 可用同位素底物和非同位素底物（生物素和地高辛标记的核苷酸等）。

4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带地高辛标记核苷酸三种 选择。

5. 同时提供非标记的 dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺 入比例。 6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern Blot（不推荐用于低丰度 RNA 检测）、小 RNA Northern、Southern Blot （不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
规格及成分 成 份 编 号 十孔盒包装
TdT 缓冲液，5× 90605a 20 uL
TdT 末端转移酶（10 U/uL） 90605b 10 uL
dATP，2 mM 90605c 5 uL
标记核苷酸 见注 （A、B、C 不同，见注）
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90605sc 1 份
注：A 型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷
酸；B 型提供 5 uL Biotin-11-dUTP（CAT#：100920）；C 型提供含 5 
uL DIG-11-dUTP（CAT#：100921）。

运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年

自备试剂 DNA 模板 

使用方法 1. 在 0.2 mL 微量离心管中按下表设置一个 20 uL 体系的标记反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针 DNA 的浓度）：
成份 用量
探针 DNA 100-200 pmol
TdT Buffer，5× 4 uL
标记核苷酸，1 mM
（A 型需自备标记核苷酸） 1 uL
dATP，2 mM （见下注）
TdT 末端转移酶（10 U/uL） 2 uL
超纯水 补到 20 uL
注: dATP 可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于 DIG 或 biotin 的空间阻碍，这种探针的灵敏度不一定。如果不掺入 dATP 的探针杂交效果不好，在加尾反应时掺入一定比例的 dATP 到标记核苷酸中，以控制标记核苷酸的密度不至于太
高，这样可以提高比活。标记核苷酸和非标记的 dATP的具体比例为多少，可以自己优化。
2. 37℃反应 15 分钟，延长到 30 分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾 3-5 个 Biotin 或 DIG 标记的核苷酸（标记物空间阻碍抑制延长）；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸 dATP（其他dNTP 也可，只是本试剂盒只提供 dATP 而已），每条探针上可加上约 100个核苷酸，平均含 5 个标记核苷酸
3. 70℃ 10 分钟灭活 TdT 酶。
4. 如果需要，可以 PAGE 电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针 DNA 进入有机相而丢失。