中草药DNAout

中草药DNAout

产品及特点 

基于 PCR 的中药分子鉴定方法是辨别中药真伪，保证药材质量，促进中药产业现代化的十分重要的手段。但由于日晒，高温烘烤等处理极大地破坏了中药材DNA的完整性；处理过程中多酚多糖及其氧化物也会与DNA发生复杂的化学反应，所以从中药材中提取可以用于 PCR 的 DNA 比从新鲜植物中提取要困难很多。为解决这一问题，基因在植物 DNAOUT 产品基础上开发了本产品。其特点如下：

1. 适合于大多数药材。

2. 得到的 DNA 纯净，OD260/280 一般都在 1.6 以上，原液或 100 倍之内的稀释液一般都能直接作为 PCR 模板。

3. 操作简单，整个过程只需要三十分钟左右。

4. 试剂无毒无害，环保卫生。
规格及成分 成 份 编 号 小编盒包装 
中草药 DNAout 溶液 A 60805a 75 mL 中草药 DNAout 溶液 B 60805b 75 mL 使用手册 60805sc 1 份

运输及保存 常温运输及保存，有效期一年。

自备试剂 氯仿、异丙醇、75%乙醇 

使用方法 

1. 65℃预热溶液 A，待其沉淀溶化后，充分混匀，取 0.75 mL 加入到 10-15mL的塑料离心管中并放置于 65℃待用。

2. 称取 20 mg 左右的中草药，先剪成或研磨成微小的碎片，然后转移到预热的溶液 A 中匀浆，匀浆过程中将产生大量泡沫，属于正常现象。也可以液氮研磨后将中草药粉末加入到预热的溶液 A 中(建议不要在陶器或玻璃研钵中研磨，因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附 DNA，降低 DNA 回收量。但可以在塑料研钵中研磨)。

3. 将匀浆液置于 65℃水浴保温 5 分钟，然后全部转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(此时匀浆液较为粘稠，可将枪头剪去一截后转移上清，植物碎片可倒入)。 

4. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，将上清转移到新的 1.5mL 塑料离心管中(上清的体积一般为 200-700 μL，如果体积超过 700 μL，多余部分可以不要)。有的上清液会有少量细小块状物，但对后续操作没有影响，不必进行特殊处理。 

5. 在上清液中加入等体积的溶液 B，上下颠倒 30 秒充分混匀（溶液将呈白色混浊状），然后置冰浴中 5 分钟。 

6. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，转移上清到新离心管中。

7. 加入 0.2 mL 的氯仿(自备)，震荡器上充分振荡 30 秒混匀。

8. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，两相交界面将有白色膜状物。小心转移上清到新离心管中。

9. 重复氯仿抽提步骤一次，此步可以有效去除含色素物质。

10. 加入 0.6-1 倍体积的异丙醇(自备)，上下颠倒 30 秒混匀。

11. 12000-15000 g 离心 5 分钟，弃上清，管底将有微小 DNA 沉淀。

12. 沉淀用 75%乙醇清洗 2 次后，室温晾干。

13. 加入 50-100 μL 自备缓冲液(如 TE)溶解沉淀。DNA 即可用于电泳，酶切和PCR 等反应。如果需要测 OD，则必须乙醇沉淀去除降解的 RNA。注意:用本产品提供的 RNase 处理 DNA 样品时,做好按《分子克隆手册》等参考书上的方法彻底去除其中的 DNase。