一步法大提质粒DNAout

一步法大提质粒DNAout

产品及特点

本产品是在分枝杆菌DNAOUT（CAT#:70702）基础上开发的柱式升级 产品，具有下列特点：从水体中提取高纯度的基因组DNA是水体环境监测非常重要的手段，但是由于水 体样品存在腐殖酸、金属离子等PCR抑制剂，从水样中提取DNA一直比较棘手。为 解决此问题，本公司利用在核酸纯化领域的丰富经验和先进的纯化技术开发了本产 品，它具有下列特点：本产品是整合土壤DNAOUT（CAT#：60701）和柱式腐殖酸清除剂 （CAT#：60801）两个产品而得的柱式升级产品，它结合了两者的优点，专门用 于从各种土壤样品和河海沉积物中提取高质量的DNA的试剂。本产品是在天净沙细菌DNAOUT基础上开发的柱式升级产品，可以用 于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。本产品是在一步裂解式质粒DNAOUT（CAT#：70903）基础上开发的、 能够快速从100 mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即 可以完成细菌裂解，并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质 粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是： 1. 快速，整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟，比传统的碱变性方法快捷。
2. 超螺旋比例高，独创的非碱法一步式细菌裂解技术，避免了强碱对DNA的损 害，得到的质粒DNA切口更少。
3. DNA纯度高，几乎没有基因组DNA和RNA污染，OD260/280一般在1.7-1.9 之间。
4. DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5. 大吸附量为600 mg DNA，具体产率取决于质粒拷贝数。
6. 过程简单，重复性和稳定性好。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
溶液 A LM70903a 70 mL 大离心吸附柱 LM90303 5 套 专用洗柱液 LM70903b 50 mL×2 DNA 洗脱液 2.0 111205 10 mL 使用手册 71101sc 1 份

运输及保存 常温运输及保存（溶液 A 需要 4℃保存），有效期一年。 

自备试剂 无

使用方法 1. 用 50 mL 离心管分数次收集 10-60 mL 新鲜的菌液，一般可以 5000 rpm离心 10 分钟，去除上清即得细菌沉淀。

2. 往细菌沉淀中加入 14 mL 溶液 A，充分振荡悬浮或吹打混匀。注意：充分重悬细胞沉淀（无块状物）对于获得高的质粒产量十分重要。

3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中，放入到配套的收集管中。

4. 6000 rpm 离心 5-10 分钟，弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA，而将基因组 DNA 和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液，可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。

5. 将 10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟后 6000 rpm离心 5 分钟，弃穿透液。

6. 重复上步一次。

7. 将 10mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，室温静置 2 分钟后 6000 rpm离心 5 分钟，弃穿透液。

8. 重复上步一次。

9. 室温 6000 rpm 空甩 5 分钟，弃穿透液。注意：此步很重要，不能跳过。

10.将离心吸附柱放入一个自备的、干净的 50 mL 塑料离心管中，加 1 mL 通用洗脱液（洗脱液如加热到 50-65℃效果更佳），室温静置 2 分钟后 6000rpm 离心 5 分钟，收集液即是质粒 DNA 溶液。

11.重复上步 1 次以便洗脱更多的质粒 DNA。

12.合并所得质粒 DNA，立即使用或-20℃储存