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柱式无内毒素质粒DNAout

Column Endo-free Plasmid DNAOUT
￥390 50次 起订
上海 更新日期：2024-11-22

上海泽叶生物科技有限公司

VIP5年
联系人：宛双凤
电话：021-61998551拨打
手机：13122364865 拨打
邮箱：sale1@shzysw.net

产品详情:

中文名称：
柱式无内毒素质粒DNAout
英文名称：
Column Endo-free Plasmid DNAOUT
保存条件：
常温运输和保存
纯度规格：
99.99%
产品类别：
分子生物学 DNA纯化

柱式无内毒素质粒DNAout

 

产品及特点 本产品是整合基因柱式质粒 DNAout 和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是天泽基因推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取 DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒 DNA 的弊端。用本产品提取的质粒 DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

1. 操作简单，只在经典的柱式质粒 DNA 提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除 99%以上的内毒素。
3. 质粒丢失少，产率只比柱式质粒 DNAout 低 5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA 可以直接用于转染等实验。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
菌体内毒素清除剂 90901 200mL 柱式质粒 DNAout 溶液 A 60205a 13 mL 柱式质粒 DNAout 溶液 B 60205b 13 mL 柱式质粒 DNAout 溶液 C 60205c 18 mL RNase A（10mg/mL） 3160 0.3mL 离心吸附柱 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脱液 2.0 111205 10 mL 使用手册 60205sc 1 份 
运输及保存 常温运输及保存，有效期一年。RNase A（10mg/mL）收到样品后需要低
温保存。

自备试剂 菌液

使用方法 一: 用菌体内毒素清除剂清除 E.coli 细胞壁上的内毒素。
1. 收集 1.5-5 mL E.coli 饱和菌液，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入 1 mL 菌体内毒素清除剂温和混匀后 10,000-12,000 rpm 离心 1分钟，弃上清（含内毒素）。
3. 一次洗涤（1-2 步）可以去掉 90%以上的内毒素，如果需要，可以再重复上述洗涤操作步骤 3 次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒 DNA提取步骤。
二：从无内毒素的 E.coli 中提取质粒 DNA
4. 先将全部 RNase A 溶液全部加入到柱式质粒 DNAout 溶液 A 中，摇匀后再取用，未用完的柱式质粒 DNAout 溶液 A 好在 4℃保存。
5. 在第 3 步所得菌液中加入 250 uL 柱式质粒 DNAout 溶液 A，用枪头充分吹打使菌体重悬（此步在冰上操作效果更佳）。注意：细胞未充分悬浮会影响后续操作，可以使用漩涡振荡器帮助混匀或使用 Tip 吸头吹打沉淀至完全混匀。
6. 加入 250 uL 柱式质粒 DNAout 溶液 B（如果溶液 B 有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用），温和反复颠倒混匀 4-6 次，看到溶液变粘即可，然后冰上放置不超过 4-5 分钟。注意：此步处理不能超过 5 分钟，否则 DNA 的碱损伤比较严重。同时千万不要剧烈振荡，
否则基因组 DNA 断裂产生的片段非常容易污染质粒 DNA。溶液 B 用后需要将盖拧紧存放，否则空气中的二氧化碳会进入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的 NaOH，降低其效率）。
7. 加入 350 uL 冰上预冷的柱式质粒 DNAout 溶液 C，反复颠倒混匀 4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上放置至少 5 分钟。
8. 高转速（12,000 rpm 以上）4℃离心 5 分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。如果此步的离心在室温进行，更容易出现沉淀物漂浮的现象。
9. 静置 2 分钟以让质粒 DNA 与吸附柱充分结合，此步十分重要。
10. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管中的废液。
11. 加入 500 uL 的通用洗柱液，室温 12,000 rpm 离心 1 分钟，弃收集管中废液。注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
12. 重复上步 1 次。
13. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响 DNA 的后续使用（如 DNA 上样时不能沉淀到加样孔中）。
14. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 mL 塑料离心管（自备）中，加入 30-100uL 65-80℃预热的 DNA 洗脱液 2.0，室温放置 2 分钟。常温的 DNA洗脱液 2.0 也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
15. 室温 12,000 rpm 离心 1 分钟，离心管底溶液即质粒 DNA。1. 由于的吸附柱结合 DNA 能力较强，如果再加适量 DNA 洗脱液2.0 到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多质粒 DNA（相当于一次洗脱的 20-30%），但注意不要使用上步得到的 DNA 洗脱液 2.0 来洗脱。
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公司简介

上海泽叶生物科技有限公司是一家服务于生命科学领域的高新技术企业，主要为科研机构、高校、院所及企业产品开发研究提供所需要的科研类试剂、耗材、仪器、技术服务等。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学、材料科学，通用试剂、药物合成试剂、手性化合物、催化剂及配体、分析试剂、生物试剂，检测试剂等等

成立日期 (9年)
注册资本 100万元整
员工人数 1-10人
年营业额 ￥ 100万以内
经营模式 贸易,试剂,定制,服务
主营行业 生物化工,有机原料,化学试剂,医药原料,技术服务

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