柱式病毒DNAout

柱式病毒DNAout

产品及特点 本产品是基因一管式病毒 DNAOUT 的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等）中提取微量病毒DNA 的产品，它具有下列特点：

1. 操作简单，整个过程只需要 20 分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。

2. 灵敏度高，通过 PCR 检测到的最终灵敏度可以达到 30-50 拷贝/mL。

3. 安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。

4. 如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理 1.5 mL 液体病毒样品。

5. 与 PCR 和荧光 PCR 兼容。

6. 价廉物美，性价比远高于国外同类产品。

7. 适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。 
规格及成分 成 份 编 号 大扁盒包装
DNA 病毒裂解液 LM3674a 30 mL 上柱结合液 LM190602 40 mL 离心吸附柱 LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL DNA 洗脱液 3.0 LM170603 10 mL 使用手册 LM70701sc 1 份

运输及保存 常温运输及保存，DNA 病毒裂解液长期（1 月以上）放置时需要放 4℃，有效期一年。

自备试剂 无，但需要自备 RNase-free 的 1.5 mL 离心管（耗材）。

使用方法

 1. 如果有 N 个样品，标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管(如 SarstedtCAT#:782.694.006)，多出的一个为阳性对照，一个为阴性对照。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入 0.2 mL 液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等），阳性对照和阴性对照。

1.1、 如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入 0.2mL 自备生理盐水中挤压出液体，然后取 0.2mL 进行提取。

1.2、 如果是粪便等半固定样品，则取约 0.3mL 的样品，加入 0.3mL 自备生理盐水，震荡重悬，离心取 0.2mL 上清进行提取。

1.3、 如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心用上清，也可以直接取用，但后者提取的病毒 DNA 中会有少量细胞的基因组 DNA 污染（但不影响 PCR）。血浆的抗凝剂必须是 EDTA 或 ACD，不能是肝素。使用ACD 时由于所加入 ACD 会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左右。血浆按 0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。

1.4、 如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀浆后离心，用 0.2mL 上清液（含病毒）进行提取，但此种情况下最后得到的病毒DNA 不可避免的会含有少量基因组 DNA 污染（但不影响 PCR 检测）。

1.5、 如果液体样品中的病毒需要富集，可以使用 1.5 mL 上述方法得到的液体在 4℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、用剩下的 0.2mL 继续操作。

2. 加入 0.6 mL DNA 病毒裂解液到各离心管中，振荡 30 秒混匀后室温放置 10 分钟裂解病毒。注意：DNA 病毒裂解液在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液（0.8mL）

到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。

4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

5. 将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟。

6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。

8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp 室温离心 1 分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤，可以跳过。

9. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。

10. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 RNase-free 的 1.5 mL 离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-100 uL DNA 洗脱液 3.0，然后室温放置 2 分钟。

11. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟，离心管中的溶液即为病毒 DNA 溶液。

12. DNA 样品可以直接用于 PCR，也可放-20℃长期保存。