外泌体 DNA-RNAout

外泌体 DNA-RNAout

产品及特点
本外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (40-100nm)。多种细胞在正常及 病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经 多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。所有培养的细胞类型均可分泌外泌 体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们 分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。但从外泌 体提取核酸（主要是 RNA）非常棘手，为此本公司开发于外泌体核酸（DNA 和 RNA） 纯化试剂。本产品具有下列特点：

1. 一管式操作，在同一试管中完成，减少样品丢失。

2. 沉淀法，不使用离心柱，能有效避免小 RNA 的丢失。

3. 能同时提取 RNA（包括 RNA 和 miRNA）和 DNA。

4. 回收率达到 90%以上，高于绝大部分基于离心柱的提取方法。
规格及成分 成 份 编 号 小扁盒包装 
外泌体核酸提取溶液 A LM180807a 30 mL 外泌体核酸提取溶液 B LM180807b 35 mL 外泌体核酸提取溶液 C LM180807c 50 mL RNase-free 水 LM80403 1 mL 使用手册 LM180807sc 1 份

运输及保存 常温运输保存，但外泌体核酸提取溶液 A 长期保存需要放 4℃。有效期一年。

自备试剂 外泌体。

使用方法一、备外泌体（本试剂盒不提供相关试剂） 注意：自备的外泌体需要立即使用或放-80℃长期保存。用于核酸提取的外泌体可以 是沉淀，也可以是重悬液。 二、外泌体核酸提取

1. 从冰箱取出外泌体核酸提取溶液 A 放室温或握在手上融化，直到没有任何晶体。

2. 标记 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006)，为避免污染， 建议不要使用压盖式塑料离心管。好在每个管盖上做个标记，以在下步离心时有 意将标记方向朝向心面或离心面。

3. 将不超过 200μL 的外泌体重悬液加入到标记好的塑料离心管中。

4. 每管中加入 600μL 外泌体核酸提取溶液 A，盖上盖子后振荡数秒混匀。

5. 室温放置 3 分钟。

6. 加入 0.7 mL 外泌体核酸提取溶液 B，旋紧盖后振荡 30 秒混匀。

7. 14,000 g 室温离心至少 15 分钟。注意：离心时如果把标记固定朝向心面或离心面， 则在后面的操作均得按此朝向进行离心。

8. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀（此时可能看不见）。

9. 加入 1.0 mL 外泌体核酸提取溶液 C, 振荡数秒.

10. 14,000 g 室温离心 5 分钟。注意：离心管标记的朝向要跟上面的一致。

11. 小心移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的核酸沉淀（可能在离心管内壁的 离心面呈膜状）。

12. 再短暂离心数秒, 用移液器移弃残留液体（约 50 μL）。

13. 加入 200 μL RNase-free 水，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状沉 淀。如果溶液稍呈混浊状属于正常。注意：所得溶液即为外泌体核酸溶液。如果只 需要 RNA，必须去除 DNA，则另外用自备的 RNase-free DNase 对 DNA 污染进 行降解。反之如果只需要 DNA，必须去除 RNA，则另外用自备的 DNase-free RNase 对 RNA 污染进行降解。

14. 直接取适量用于后续实验。样品可以室温放置 2 小时，也可保存于-80℃保存一个月。 

5. 无毒环保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有机溶液。

6. 本产品只能用于科研，不能。用于临床