柱式血液RNAout

柱式血液RNAout

产品及特点

本产品经过基因精心优化而得，多项指标超过国内外同类产品。本产品是基因在血液 RNAOUT（CAT#：3071）基础上开发的柱式升级产品，

专门从动物全血样品中快速提取总 RNA。跟血液 RNAOUT 相比，本产品具有

下列特点：

1. 比血液 RNAout 更加简单快捷，直接使用新鲜的或冷冻的抗凝全血样品，不需裂解红细胞等任何预处理步骤，整个提取过程只需要十分钟左右，可以全在室温下进行。

2. 产量和纯度更高，OD260/280 均在 2.0 左右，产率一般为 2-5 ug/mL人血。

3. 每次微量提取的大样品处理量可以达到 1.5 mL，高于进口的同类产品。

4. 与常用的抗凝剂(包括肝素，EDTA，柠檬酸钠，草酸钠)兼容，得到的RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 Northern 杂交等研究。
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
柱式血液 RNAout 溶液 A LM71202a 50 mL 柱式血液 RNAout 溶液 B LM71202b 15 mL（棕色瓶） 柱式血液 RNAout 溶液 C LM71202c 50 mL 离心吸附柱 LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL RNA 洗脱液 LM71207 10 mL 使用手册 LM71202sc 1 份

运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂 氯仿。 

使用方法 

1. 将 0.2-1.5 mL 新鲜或解冻后的抗凝全血加入到 1.5 mL 塑料离心管中。

2. 12000-15000 g 室温离心 3 分钟，弃上清(血浆)。如果此时血液细胞沉淀体积大于 0.2 mL， 则需要减少血液的使用量，具体减少量需根据具体情况决定，因为各个个体(尤其是患者)血液中白细胞数目差别很大。

3. 将 1 mL 溶液 A 加入到血液细胞沉淀中，用移液枪充分吹打沉淀使细胞裂解。

4. 将 0.3 mL 的溶液 B 加入到离心管中，剧烈震荡 30 秒。

5. 和 0.2 mL 氯仿加入到离心管中，剧烈震荡 30 秒。

6. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟，将上清液(为无色或浅红色，约0.5-0.9 mL)转移到另一干净离心管中。注意：转移的液体不要超过 0.7mL，否则下一步不能加入等体积的溶液 C。为防止污染，好留 100 uL左右的上清液。下层有机相一般呈深红色，中间层为白色，含有 DNA，蛋白质和其他细胞破碎物，避免触及或吸取。

7. 加入等体积的溶液 C，充分颠倒混匀。

8. 分两次将溶液转移到离心吸附柱中，每次转移后 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。

10. 如果有必要，可以再加 0.3 mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。注意：增加此步可以进一步提高 RNA 的纯度。

11. 室温 12000-15000 g 离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA 的后续反应。

12. 将离心吸附柱转移到一个自备的 RNase-free 的收集管中，加入 50-100uL RNA 洗脱液，室温放置 1-2 分钟。

13. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 RNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern 杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA 电泳，因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。

15. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。人血 RNA 产率一般为 2-5 ug/mL。

16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。