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RNase-free Tris-HCl溶液,1M,pH8.5

RNase-free Tris-HCl溶液,1M,pH8.5

RNase-free Tris-HCl
询价250mL起订
上海 2022-01-22

上海泽叶生物科技有限公司

VIP3年

产品详情:

中文名称:
RNase-free Tris-HCl溶液,1M,pH8.5
英文名称:
RNase-free Tris-HCl
CAS号:
保存条件:
常温运输和保存
纯度规格:
99.99%
产品类别:
分子生物学 RNA纯化

RNase-free Tris-HCl溶液,1M,pH8.5

英文名称:

运输:常温

保存:常温

有效期:1年

货期:现货

其他:

产品介绍:

用于RNA实验的常规溶液

 

使用方法

 

1. 将 50-300mg 昆虫组织放入 10-15 mL 塑料离心管中,加入 1 mL 溶液 A,然后用匀浆器匀浆 5-20 秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织,砚磨完后加入 1 mL 溶液 A。注意:溶解溶液 A 沉淀。溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。

 

2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的 1.5 mL 塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。

 

3. 在离心管中加入 0.3 mL 的溶液 B 和 0.2 mL 自备氯仿,在振荡器上振荡30 秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。

 

4. 室温 12,000 rmp 离心 3-5 分钟,两相间将有约 5-10 毫米厚的细胞破碎物。

 

5. 将上清液(约 0.6 mL)转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中,下层有机相和中间层含有 DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。好留下 100 uL上清液不取。

 

6. 加入等体积的溶液 C,充分颠倒混匀。

 

7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心半分钟,弃穿透液。

 

8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中, 12,000 rmp 室温离心半分钟,弃穿透液。

 

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液,室温 12,000 rmp 离心半分钟,弃穿透液。

 

10. 加 0.3 mL 通用洗柱液,室温 12,000 rmp 离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。

 

11. 室温 12,000 rmp 离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响 RNA的使用。

 

12. 将离心吸附柱转移到 RNase-free 收集管中,加入 50-100 uL RNA 洗脱液,室温放置 1-2 分钟。

 

13. 12,000 rmp 室温离心半分钟,离心管中溶液即为 RNA 样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。

 

14. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做 Northern 杂交,强烈建议用户使用甲醛变性进行 RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的 RNA 分子(BioTechniques,28:414,2000)。注意:大部分昆虫的 28S RNA 被切割成两个小的片段,彼此用氢键相连,所以在甲醛变性胶中,没有 28S带出现(文献见:Eva C. Winnebeck,Craig D. Millar and Guy R. Warman,Why does insect RNA look degraded Journal of InsectScience: Vol. 10:1-7)

 

15. RNA 产量产率测定:将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度(1 OD260 的RNA=40 μg/mL),进而计算出 RNA 的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA 产量/组织用量)。

 

16. RNA 纯度测定:无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响 RT-PCR 等反应。

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