非酶DNA清除剂-2

非酶DNA清除剂-2

产品及特点
用等方法提取的细胞总RNA样品中经常会含有基因组DNA污染，这些污染会影响下游的RT-PCR和Northern杂交等实验。目前最常用的RNase-free DNase处理方法因DNase中所含残留的RNase能破坏RNA完整性而具有很大缺陷。开发的非酶DNA清除剂-2不但彻底避免了RNase-free DNase的这一缺陷，同时还具有操作快速，稳定性好和性价比高等诸多优点，完全可以替代价格昂贵的RNase-free DNase。
1. 高效，能使总RNA中的基因组DNA污染降上百倍（根据PCR检测）而RNA分子完整性不会受到任何影响。
2. 本身不含RNase污染。
3. 快速，全部操作在样品管中完成，只需要十多分钟。
4. 稳定，本产品为非酶产品，可以常温运输和4℃长期保存；而RNase-freeDNase的运输和长期保存必须在低温进行。
5. 性价比高，单位成本远低于RNase-free DNase。
6. 可以用于小RNA中DNA污染的清除。
使用及效果
将总RNA与本产品溶液A按1:1的比例混合后加1/2体积的自备氯仿，振荡后室温离心1-3分钟，加两倍体积的溶液B，混匀后离心10分钟，用1 mL 75%的乙醇洗涤沉淀一次后即得RNA沉淀。

产品及特点

由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是临床分子生物学研究中的一个棘手的问题。为解决此问题，本公司在非冻型组织RNA保存液的基础上，开发了本产品，它具有下列特点:

1. 能快速渗透到新鲜血液细胞内，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常温可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3个月。

2. 操作简单，直接将本产品和新鲜血液细胞沉淀按比例混合即可。

3. 适用于人新鲜血和哺乳动物新鲜血液，不适用于陈旧血液和冻凝血液，也不适用于禽类血液和其他动物血液。

4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。

5. 保存的样品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。

使用及效果

将本产品与新鲜血液样品按4:1的比例（4份本产品加1份新鲜血液）混合后即可放置。放置结束后将样品转移到离心管中，5000 g室温离心1分钟，小心吸出浅粉红色的上清液，棕红色沉淀（血细胞和蛋白沉淀）直接用于后续的总RNA提取。

1. 新鲜细胞：如果试剂没有问题，且外源性污染也可以排除，那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养皿中裂解细胞，一定要使裂解液能覆盖住细胞。

2. 新鲜组织：某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏，胸腺等)，即使使用电动匀浆器匀浆也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮条件下将组织研碎，并且匀浆时使用更多裂解液。

3. 冷冻样品：样品取材后应立即置于液氮中速冻，然后移至-70℃冰箱保存。样品决不能未经液氮速冻而直接保存于-70℃冰箱中。冷冻样品，即使是冷冻细胞，如果不在液氮条件下研磨碎，而直接加入裂解液中匀浆，RNA也比新鲜样品更容易降解。样品在与裂解液充分接触前决不能出现融化，所以研磨用具必须预冷，在碾磨过程中要及时补充液氮。样品研碎后，在液氮刚刚挥发完时，将样品迅速转移到含裂解液的容器中，立即混匀匀浆。

4. 外源RNA酶的污染：试剂，器械及实验环境中的RNA酶进入实验系统,可考虑华越洋产品：外源RNA酶清除剂（RNase remover)解决。

5. 内源RNA酶的污染：抑制剂失效或者用量不够，实验样品过多；匀浆时温度过高。

RNA提取得率低

1. 该组织或者细胞中RNA含量偏低：不同细胞和组织中RNA的丰度不同，如肝脏，胰腺，心脏等是高丰度组织(总RNA含量2-4μg/mg)，脑，胚胎，肾脏，肺，胸腺，卵巢等是中丰度组织(总RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低丰度组织(总RNA含量<0.05μg/mg)。

2. 组织起始量太少或者太多：样品量过少，则细胞组织中RNA含量较低；样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力，裂解将不完全，从而导致RNA得率低。