miRNA cDNA第一链合成试剂盒

miRNA cDNA链合成试剂盒
产品及特点本试剂盒采用在 miRNA 3’末端加多聚 A 尾的方法来使 miRNA 具有 Poly(A)

尾，之后再使用 Oligo(dT)-Tag 引物进行逆转录反应，最终合成 miRNA 对应的链 cDNA。其反应流程如下：本产品具有如下特点：

1. 两步式操作，先进行 Poly(A)加尾，再进行逆转录反应。

2. 只需要 1 ug 的 total RNA。

3. 所得 cDNA 可用于检测多种 miRNA，不仅减少了误差、节约了样品，同时还

实现了检测的高通量。

4. 与 miRNA 荧光定量 PCR 检测试剂盒兼容。

5. 特异性好，独特的 miRNA 引物及反应体系避免了 Pre-miRNA 的非特异扩增。
miRNA cDNA链合成试剂盒
规格及成分 成 分 产品编号 25 次塑料盒包装
E.coli Poly(A) 聚合酶(5U/ uL) 120509A 10 uL
10×Poly(A) 聚合酶反应液 120509B 50 uL
ATP 溶液，1mM 131013 50 uL
Oligo（dT）-Tag 引物（0.5ug/uL） Yw806B 25 uL
MMLV 逆转录（含 RI） 60906A 50 uL
4×RT Buffer（含 dNTP） 60906B 125 uL
RNase-free 水 80403 1 mL

miRNA cDNA链合成试剂盒运输及保存 低温运输，-20℃保存

使用方法 一、对 miRNA 3' 末端进行加 Poly (A)处理

1. 在冰上预冷 RNase-Free 的反应管内加入以下试剂至总体积 20 uL。注意需要

最后加入 E.coli Poly(A)聚合酶。

试剂组分 体积

自备的 Total RNA（见注） 1 ug

10× Poly(A)聚合酶反应液 2 uL

ATP 溶液，1mM 2 uL

RNase-Free 水 补水至 20 uL

E.coli Poly(A)聚合酶(5 U/ uL) 0.4 uL（2U）

注：在反应中使用的 Total RNA 必须含有 miRNA。也可以直接使用 miRNA（建议加入量为 2–5uL，需根据目的 miRNA 的丰度决定）。

2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 37℃反应 60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验（注意：只能把 2uL 直接用于后续的 RT 反应，多于 2uL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀，再将加尾后的 miRNA 溶于水，然后再取所需量用于 RT。如果不经过沉淀，带入的残留的 poly（A）聚合酶反应液将会干扰 RT 反应），也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。

二、对带 Poly (A)尾巴的 miRNA 进行逆转录反应

3. 按照下表设置 20 uL 体系的 RT 反应：

成分 体积

Poly(A) 反应产物（来于上步） 2 uL

RNase-Free 水 10 uL

Oligo（dT）-Tag 引物 1 uL

4×RT Buffer（含 dNTP） 5 uL

MMLV 逆转录酶（含 RI） 2 uL

4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液，短暂离心后在 42℃反应 60 min。

5. 70℃保温 10 min 终止反应。

6. 合成的 cDNA 反应液可放置于-20℃保存；也可以暂时冰上放置，立即用于后续的荧光 PCR 定量检测，不需要纯化。