cDNA第二链合成试剂盒

cDNA第二链合成试剂盒
产品及特点cDNA 第二链合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 杂合链中的 RNA 产生切口，再用 DNA Polymerase I 通过切口平移(nick translation)反应进行RNA 链取代合成 cDNA 第二链，其示意图如下:

本产品具有下列特点：

1. 即开即用，含有合成 cDNA 第二链的所有试剂（包括 RNase H、E.coli DNA聚合酶 1 和 DNA ligase。

2. 一管式操作，不需要每次进行纯化，不丢失宝贵德样品。

3. 所得双链 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交等。

4. 本试剂盒足够 30 次 80uL 体系的 cDNA 第二连合成反应。
cDNA第二链合成试剂盒
规格及成分 成分 编号 十孔盒包装
5×cDNA 第二链合成缓冲液 131005a 250 μL
20×cDNA 第二链合成酶混合液 131005b 60 μL
0.5 M EDTA 溶液 130309 60 μL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 131005sc 1 份

cDNA第二链合成试剂盒运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备试剂 cDNA 链合成试剂等

使用方法 一、合成 cDNA 条链

本试剂盒不提供 cDNA 链合成试剂，用户需自备相关试剂合成 cDNA链。

二、合成 cDNA 第二链

1. 在冰浴上向 5uL 已经完成 cDNA 条链合成的反应体系（逆转录体系）中依次加入下表试剂，如果多于 5uL，请只取用 5uL：

成分 用量

超纯水 25 μL

cDNA 第二链合成缓冲液 8 μL

cDNA 第二链合成酶混合液 2 μL

共 40uL，轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温 2 小时

自备的 T4 DNA 聚合酶（见注） 1 μL

轻柔吹打混匀后，16℃继续保温 30 分钟

0.2M EDTA 溶液 2 μL

注：克隆双链 cDNA 一般需要平末端化，需要此步处理。PCR、SSH 等后续处

理一般不需要把双链 cDNA 平末端化，则可以跳过 T4 DNA 聚合酶处理步骤，

直接用 EDTA 终止反应。

2. 电泳 5 μL 检测 cDNA 质量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范围内呈模糊一片，则 cDNA 合格。如果没看见 cDNA 或有其他异常，需查找原因后再继续。

3. 所得 cDNA 可以直接用于后续的常规 PCR、real-time PCR、cDNA 文库构建、抑制性差减杂交（SSH）等实验。