BCA法蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明书

货号：PN0120

规格：500微孔

保质期：有效期1年。

产品内容：                        

产品简介：

    碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺， Cu⁺与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA, EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

操作说明：

试剂使用前请先恢复至室温（25℃）。

一.  微孔酶标仪法

1. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品：取10μL BSA标准品用PBS稀释至100μL（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/mL。将标准品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足至20μL。
3. 将样品作适当稀释（多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20μL到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4. 各孔加入200μL BCA工作液，37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

二.  分光光度计法

       如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

       步骤如下：

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品：取100μL BSA标准品用PBS稀释至1mL（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/mL。
3. 取八支（或者更多）5mL离心管，标上号，按下表加入试剂。

4. 37℃ 放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。          

注意事项：

1. BCA试剂在低温条件下易析出（针状结晶），可37℃温育使其完全溶解，不影响使用。
2. 长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。
3. 样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。