福尔根DNA染色液(Feulgen stain)

福尔根DNA染色液(Feulgen stain)

货号：RS1710

规格：3×50ml/3×100ml

保存：4℃，避光，6个月

试剂盒组成：

简介： 

    脱氧核糖核酸(DNA)染色方法有Feulgen法、甲基绿-派洛宁法、吖啶橙荧光法等，其中最经典的是Feulgen法, Feulgen法是一种经典的酶组织化学法。 

Feulgen stain 的原理在于：DNA经温和的弱酸(例如盐酸)水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。醛基在原位与Schiff reagent结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色。紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基（醌基是一个具有颜色的发色团），所以凡含有DNA的部位，就呈紫红色。但是该水解作用不影响核糖-嘌呤结合键，因此RNA用此法处理后则分解，所以该法不适用于证明RNA。   

操作步骤（仅供参考）： 

(一) 石蜡切片染色 

1、 组织固定：Carnoy固定的石蜡切片较好，10%的福尔马林亦可，不宜使用Bouin固定液。 

2、 弱酸工作液的配制：

按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制，即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份，充分混合，即获得弱酸工作液。

 3、 石蜡切片脱蜡至双蒸水。

 4、 切片室温下在弱酸工作液中浸洗一下。 

5、 切片放入已预热到60℃的弱酸工作液，孵育8min。 

6、 切片放入室温的弱酸工作液中冲洗1min。 

7、 蒸馏水冲洗。 

8、 切片入Schiff reagent内，置于室温暗处染色30~60min。 

9、 在上述染色过程中，配制SO₂水工作液。

按照亚硫酸盐溶液：弱酸溶液：蒸馏水=5:1:94的比例配制SO₂水工作液，即取亚硫酸盐溶液5份、弱酸溶液1份、蒸馏水94份，充分混合，即获得SO₂水工作液。即配即用，不易久置。 

10、 用新鲜配制的SO₂水工作液洗切片3次，每次90s。

11、蒸馏水中洗净。 

12、经系列乙醇脱水。 

13、二甲苯透明并封片。

 (二)冰冻切片染色 

1、 冰冻切片预处理：先用乙酸1份、无水乙醇3份混合后，即为固定液，固定10min。

2、 由无水乙醇脱水--逐级下行--双蒸水。 

3、 弱酸工作液的配制：

按照弱酸溶液:蒸馏水=1:4的比例配制弱酸工作液，即取弱酸溶液1份、蒸馏水4份，充分混合，即获得弱酸工作液。 

4、 余下步骤同上述石蜡切片染色。 

 染色结果： 

细胞核内DNA          红紫色 

     阴性对照： 将同样切片经上述步骤， 只有步骤5改为放入室温的弱酸工作液，室温放置15min。其结果为细胞核DNA阴性。  

注意事项： 

1. 水解时间很重要，并且应使用恰当的固定时间。不同的固定液水解时间不一样。 

2、 注意Schiff reagent的纯净程度，若变浅粉红亦可考虑使用，颜色变红则不能用。 

3、 去除切片上多余的Schiff reagent的方法应以SO₂水洗法为好。 

4、 应作阴性对照试验。 

5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。