Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

实验数据

价格对比

产品描述

Biotool Vita-Orange细胞活性检测试剂是一种氧化还原反应的指示剂，在电子载体1-Methoxy PMS存在的条件下，利用活细胞中的脱氢酶催化四唑盐WST-8生成甲臜染料（图1），而且甲臜染料的生成量与活细胞的数量成线性关系（图2）。该试剂的灵敏度高于MTT、XTT、MTS或WST-1等其他四唑盐。
Biotool Vita-Orange细胞活性检测试剂为一瓶即开即用的溶液，该试剂安全，无放射性，性价比高，为客户提供方便、快速、可靠的使用体验。

图1: Working mechanisms of Vita-Orange Cell Viability Reagent.

图2: Cell number vs OD value using Biotool Vita-Orange Cell Viability Reagent. K562 and Hela cells were seeded into 96-well plate at different density in 100 μl culture medium in triplicate respectively. 16 hours later, 10 μl/well Vita-Orange Cell Viability Reagent were added, allowing to continuously culture for indicated duration in cell culture incubator. The absorbance at 450 nm were then measured in a microplate reader. Medium only wells were served as blank control. Note the great linear relationship between cell number per well versus OD450 values at all incubation time.

图3: Time dependent color development using Biotool Vita-Orange Cell Viability Reagent. HEK293 cells were seeded into 96-well plate at different concentrations in 100 μl culture medium in triplicate. 16 hours later, 10 μl/well Vita-Orange Cell Viability Reagent were added, allowing to continuously culture for indicated duration in cell culture incubator. The absorbance at 450 nm were then measured in a microplate reader. Note the great linear relationship of color development versus incubation time at all cell concentrations.

应用

• 细胞增殖测定: Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂具有水溶性、稳定性好、无细胞毒性。
• 细胞活力检测: 细胞代谢活力与染料产生随细胞活力的变化而变化。
• 细胞因子实验: 测定细胞因子诱导的增殖，恢复及扩增细胞。
• 细胞毒性实验: 有毒的化学物质导致的死亡的细胞对该检测中颜色的变化没有影响，只有活细胞能够转变颜色。Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂本身无毒性，对细胞安全。

实验方法

需要的但不包括在该试剂盒中的实验器材

• 荧光计数器
• 多道移液器
• 3 % SDS（可选）

准备细胞

对于贴壁细胞，接种于培养瓶后使之贴壁并生长4–24小时，然后开始检测。对于悬浮细胞，接种与培养瓶后可以立即检测或24小时之内检测。

实验步骤

可选步骤：用测试化合物处理细胞24-72小时后进行该实验。

1. 在细胞培养液中直接加入1/10体积的Biotool Vita-Blue细胞活性检测试剂，充分混合，保证孔中蓝色均一性，但避免气泡产生。对96孔板，每100µl培养液加入10µl活性检测试剂。
2. 于37°C培养箱中培养0.5-4小时至颜色变为橙色。应避免过夜培养。
3. 用荧光计数器测量在450nm处的吸收光。一般的OD值在0.5-2.5之间，典型的在0.8-1.5之间。
注意: 在添加Vita-Orange细胞活性检测试剂的细胞培养基中，在450nm处会有轻微的自发吸收值。该荧光背景随培养基、pH值、培养时间、暴露于光线的时间等因素的变化而变化。典型的吸收值在孵育2小时后为0.1-0.2。为了纠正背景，准备一个或多个无细胞的对照孔，计算其平均的荧光值，然后从试验孔中扣除该值。
4. 可选步骤：在100μl细胞中加入10 μl 3% SDS 以终止反应，可在2天内读取荧光值。

实验流程简图

防范措施

1. 使用前请充分混匀，避免反复冻融。
2. 如果长时间孵育（过夜），请确保在试剂添加与孵育期间维持无菌状态。细菌污染物能够还原Biotool Vita-Orange细胞活性检测试剂。
3. 在应用Biotool Vita-Orange细胞活性检测试剂之后，还可以做其他细胞增殖实验，如中性红或结晶紫。
4. 确保包括合适的对照。

储存条件

Biotool Vita-Orange细胞活性检测试剂在避光条件下可在室温保存6个月，2-8°C保存一年，-20°C及以下可保存更长时间。