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BCA蛋白浓度测定试剂盒

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500T 起订
湖北 更新日期:2024-12-16

康迪斯化工(湖北)有限公司

VIP6年
联系人:刘焕
手机:18064039730 拨打
邮箱:3127859172@qq.com

产品详情:

中文名称:
BCA蛋白浓度测定试剂盒
保存条件:
常温储存
纯度规格:
99%
产品类别:
试剂
含量:
99%
包装:
250T、500T
外观:
液体

产品简介

 

 

 

BCA蛋白浓度检测是一个实验,是根据吸光值可以推算出蛋白浓度.碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。

 

 

 

常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

 

 

 

Components

250T

500T

1000T

Storage

BCA试剂A

50mL

100mL

200mL

RT

BCA试剂B

1.5mL

3mL

6mL

RT

PBS稀释液

20mL

30mL

60mL

RT

蛋白标准(5mg/ml BSA)

1mL

1mL

2×1mL

-20℃

 

 

 

 

 

操作说明

 

 

 

一. 微孔酶标仪法

 

 

 

1. 配制工作液:根据标准品和样品数量,按50体积 BCA试剂A 加1体积 BCA试剂B(50:1)配制成 BCA工作液,充分混匀 (混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温24 小时内稳定。

 

 

 

2. 稀释标准品:取 10μL BSA 标准品用 PBS 稀释至 100μL(样品一般可用 PBS 稀释),使终浓度为 0.5mg/ml。将标准品按 0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20 μL加到 96 孔板的蛋白标准品孔中,加 PBS 补足至 20μL。

 

 

 

3. 将样品作适当稀释(多做几个梯度,如作 2 倍、4 倍、8 倍稀释),加 20μL到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量样品时误差偏大,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2 后。

 

 

 

4. 各孔加入 200μL BCA 工作液,37℃放置 15-30 分钟。用酶标仪测定 A562nm,根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发影响检测结果。

 

 

 

二. 分光光度计法

 

 

 

如没有酶标仪,可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。

 

 

 

步骤如下:

 

1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量,按50体积 BCA试剂A 加1体积 BCA试剂B(50:1)配制成 BCA工作液,充分混匀 (混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失)。BCA 工作液室温 24 小时内稳定。

 

2. 稀释标准品:取 100μL BSA 标准品用 PBS 稀释至 1ml(样品一般可用 PBS 稀释),使终浓度为0.5mg/ml。

 

3. 取八支(或者更多)5ml 离心管,标上号,按下表加入试剂。

 

离心管号

1

2

3

4

5

6

7(样品管1)

8(样品管2)

……

标准蛋白BSA

0μl

40μl

80μl

120μl

160μl

200μl

200μl适当稀释的样品1

200μl适当稀释的样品2

……

稀释液(PBS)

200μl

160μl

120μl

80μl

40μl

0μl

0μl

0μl

0μl

BCA工作液

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

2ml

 

 

 

4. 37℃放置 15-30 分钟。用分光光度计测 562nm 处吸光值,根据标准曲线计算出蛋白浓度。

 

 

 

注意事项:

 

 

 

1. 长期不用时,BCA试剂B与PBS 稀释液可置于 2-8℃保存,如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂A在低温条件下出现结晶沉淀时,可 37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。

 

2. 样品中若含有较多干扰物质时,请采用 Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。

 

3. 待测蛋白溶解于什么样的稀释液中,蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中,否者待测蛋白不蛋白标准中所含非蛋白成分不一致,有可能导致测定不准确。

 

4. 待测蛋白和蛋白标准加入 BCA 工作液后,如果发现检测效果不佳,可以室温放置 2h或 60℃放置 30min,颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。如果浓度较低,可以适当延长孵育时间或在较高温度下孵育。

 

5. 为了加快 BCA 法测定蛋白浓度的速度可以适当加热,但是切勿过热,否则易失效。

 

6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

BCA蛋白浓度测定试剂盒

公司简介

康迪斯化工(湖北)有限公司是一家立足于生命科学领域有自主知识产权的高新技术企业,主要从事生物试剂的研发与生产,并以持续探索和开发生命科学技术为动力,致力于为科研工作者提供实用、高效的科研试剂,为生命科学的研究与发展提供有意义的帮助。

成立日期 (6年)
注册资本 200万
员工人数 10-50人
年营业额 ¥ 1000万-5000万
经营模式 贸易,工厂,试剂
主营行业 无机化工,中间体,生物化工,有机原料,化学试剂

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