苏木素伊红(HE)染色试剂盒

名称 苏木素伊红(HE)染色试剂盒
   Haematoxylin Eosin (H&E) staining

规格 2×100mL | 2×500mL

存储 室温避光保存，有效期12个月

自备材料：

1、盐酸乙醇分化液
2、蓝化液（如稀氨水、碳酸锂溶液等）
3、系列乙醇
4、4%的多聚甲醛 (Cat#: PH0427)

产品简介

苏木精-伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，简称 HE 染色法 ，是病理学常规制片中最基本的染色方法。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

染色原理：

1、 细胞核染色的原理：  苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、 细胞浆染色的原理：  伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3、 分化作用：  染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

4、 返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

使用方法

操作步骤（仅供参考）：

（一） 石蜡切片染色

1、 切片脱蜡至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。 
②（可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。                       
③95%的乙醇 3～5min
④90%的乙醇 3～5min
⑤80%的乙醇 3～5min
⑥自来水或蒸馏水冲洗 1～3min

2、染色

①苏木素染色液染色 5～8min (具体时间根据染色结果和实验要求调整)
②自来水或蒸馏水冲洗 5～10s
③盐酸乙醇分化（可选） 2～5s
④自来水冲洗 20～30s
⑤蓝化液返蓝 20～40s
⑥自来水冲洗 30～60s
⑦伊红染色液染色 3～5min (具体时间根据染色结果和实验要求调整)
⑧自来水冲洗 1～5s

2、脱水、透明、封固

①80%乙醇 10～20s 
②90%乙醇 10～20s
③95%乙醇作用2次，每次1～2min。
④无水乙醇作用2次，每次2～3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。
⑥中性树脂封片。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

 
（二） 冰冻切片染色

冰冻切片不用脱蜡，可固定后直接染色，其方法与石蜡切片相同。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

 
（三） 细胞染色

1、4%的多聚甲醛固定10～20min。
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、 蒸馏水冲洗2次，每次2min。 
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间相应缩短。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

注意事项

1、 切片脱蜡应尽量干净。
2、 95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇应经常更换新液。
3、 盐酸乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
4、 染色过程推荐浅染，通常只需能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞质颜色。
5、 冷冻切片染色时间尽量要短。
6、 蓝化液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促蓝液或0.1～1%碳酸锂水溶液。
7、次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。