凝胶制备试剂盒

本产品所提供的 PAGE 胶凝固剂为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成 10% PAGE 胶凝固剂溶液（比如将0.5g

PAGE 胶凝固剂加 5ml 双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置 4℃保存两周。

I 配制分离胶

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。

2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1 mm mini-gel，分离胶溶液加约 4 ml ），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm 的水层，使凝胶表面保持平整。

4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶

去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于 1 mm 的 mini-gel，夹层胶溶液加约 1 ml ）， 然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。

4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

III 配制浓缩胶

去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2、加入 10% PAGE 胶凝固剂和 PAGE 胶促凝剂，立即涡旋混匀 5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

5、进行电泳操作。

IV 电泳

将电泳槽放入 4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液，内槽加入阴极缓冲液，30V 预电泳 10min，将样品（已经过 Tricine 上样缓冲液处理）加入点样孔后 30V 电泳 1 小时，100V 电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。

配胶说明：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的 PAGE 分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。