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凋亡检测试剂盒

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基本信息:

  • 发布时间: 2020-07-03
  • 产品名称: 凋亡检测试剂盒
  • 产品英文名称: AnnexinV Alexa Fluor488/PI
  • CAS号: 
  • 产品包装: 20T
  • 产品价格: 680.00T
  • 有效期: 
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  • 产品类别: 

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凋亡检测试剂盒

产品描述:

产品简介:
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。PS 是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是 完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此,可以采用Annexin V与PI 双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。

操作步骤:
1、细胞样品的准备:
a)对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含 EDTA 的胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻
用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次
收集到离心管内。1000rpm 左右离心 5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心管底,
可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约 50µl 左右的培养液,以避免吸走细胞。
加入约 1ml 4℃预冷的 PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清;
b)对于悬浮细胞:1000rpm 左右离心 5min,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞无法完全离心至离心
管底,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约 50µl 左右的培养液,以避免
吸走细胞。加入约 1ml 4℃ 预冷的 PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清;
2、用去离子水按 1:3 稀释结合缓冲液(4ml 4x 结合缓冲液+12ml 去离子水);
3、用 1x 结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为 1-5×106/ml;
4、取 100µl 的细胞悬液于 5ml 流式管中,加入 5µl Annexin V/Alexa Fluor 488 混匀后于室温避光孵育 5 分钟;
5、加入 10µl 20ug/ml 的碘化丙锭溶液(PI),并加 400µl PBS,立刻进行流式检测。
实验设计:
1、空白管:阴性对照组细胞,不加 Annexin V/Alexa Fluor 488,碘化丙锭溶液(PI)。用于调节电压;
2、单染管:阳性对照组细胞,只加 Annexin V/Alexa Fluor 488。用于调节补偿;
3、检测管:处理的细胞,加 Annexin V/Alexa Fluor 488,碘化丙锭溶液(PI)。用空白管和单染管调节好电压补偿
后,获得所需要的流式数据。
注意事项:
1、Annexin V 是与磷脂酰丝氨酸(PS)亲和,而 PS 在不同种属间没差异。在正常细胞中,PS 只分布在细胞膜脂
质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,PS 由脂膜内侧翻向外侧;
2、低浓度胰酶消化,轻柔吹打贴壁细胞 2~3 次,离心机 4℃1000rpm 5min 离心,处理得当的话,胰酶造成损
伤可以控制在 5%以内,有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。
3、先加PI 不仅染色是否每组都均匀充分很难判断,而且 PI 本身对细胞也是有毒性的,对实验结果影响会比胰
酶大,不建议这样做;
4、Annexin V 是Ca 依赖的蛋白,所以不能加入 EDTA,防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V,进而影
响结果。
5、用流式检测凋亡时,PI 受时间的影响很大,因标记了 PI 后会加大细胞毒性,随着时间延长会导致 PI 的染
色增加,特别是检测早期凋亡时,如果时间延长除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外,误差会明显
加大。一般 PI 加上后立刻上机,然后在一个小时内检测完成。两种方法都可以,但是按照我们操作步骤造成
的误差会更小。

  备注:产品信息可能会有优化升级。请以实际标签信息为准。 

凋亡检测试剂盒;细胞生物学
  • 供应商联系方式:
  • 联系人 马金成
  • 公司名称 北京索莱宝科技有限公司
  • 电话 010-56371250
  • 手机 15930773779
  • 传真 
  • 邮箱 2748554845@qq.com
  • 地址 联东U谷景盛南四街85A三层
  • 公司简介:
  • 北京索莱宝科技有限公司是一家集研发、生产、销售、服务于一体的高科技生物企业。技术推广;技术转让;技术咨询;技术服务;生物试剂技术开发;销售生物试剂盒、实验室专用化学试剂、实验室专用设备、办公用品、化工产品(不含危险化学品)、计算机软件及辅助设备;货物进出口、技术进出口、代理进出口;委托加工生产生物制品、生化制品、化工产品(不含危险化学品);生产生物试剂盒;批发第一类医疗器械、第二类医疗器械;批发第三类医疗器械。
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