2×SYBR Green PCR Mastermix

特别提示：包括2×SYBR Green PCR Mastermix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×SYBR Green PCR Mastermix
产品货号：QN0949
产品规格：50T|200T

本产品为应用SYBR Green Ⅰ染料进行Realtime PCR扩增反应的高效预混系统。该预混系统提供了经过优 化的缓冲液、dNTP、HotStart Taq DNA 聚合酶、SYBR Green I染料和MgCl2，使用者只需加入适量的引物、 模板和水，即可进行荧光定量PCR检测。 该预混系统中的优化缓冲液和 HotStart Taq DNA 聚合酶等可大大提高 PCR 产物的灵敏度和特异性。 Realtime PCR MasterMix 采用高效 HotStart Taq DNA 聚合酶，使 PCR 反应具有更高灵敏度和特异性。 本产品可用于荧光 PCR 检测，获得灵敏、准确且可靠的结果。可适合任意荧光定量 PCR 仪，如 ABI7000/7700/7900HT/7300/7500 Realtime PCR System、FTC2000、lightcycler 等。

产品特点：
高特异性：本产品采用热启动 DNA 聚合酶，90℃以上2min后具有扩增活性，可大大提高PCR产物的特异性。
高灵敏度：本产品包含的优化的缓冲液可检测低拷贝数的模板，且重复性好。
高适用性：本产品可适用于任意荧光定量 PCR 仪。

应用实例：模版：提取RNA，反转录成cDNA，模版稀释倍数102﹑103﹑104﹑105，设计的引物扩增的目的片段长度是125bp。

储存条件：-20℃

除了2×SYBR Green PCR Mastermix,，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型荧光定量RT-PCR试剂盒
货号：BTN101219
规格：50次
本产品是基于荧光染料检测的即用型双酶一管式RT-PCR试剂盒，可以对靶片段进行实时定量RT-PCR分析(quantitative RT-PCR、qRT-PCR)。产品含有经过优化的缓冲液组分、MMLV-Taq DNA聚合酶混合物、dNTPs、MgCl2及新型荧光染料DNAgreen等所有一管式实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板和引物即可进行实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。

产品特点：
1.一管式完成qRT-PCR反应，避免样品交叉污染，尤其适合临床应用。
2. 即开即用，用户不需要单独准备qRT-PCR所需的各种试剂。
3. 主要成分只有两个(RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix)，将加样步骤减少到zuì低，极大降低了加样误差，增加了可重复性。
4. 使用范围广，适用于从病毒RNA到人RNA的各种RNA模板。
5.高灵敏度，每个RT-PCR体系zuì低可以检测200拷贝的RNA分子，可扩增的模版RNA的zuì长达2000nt。

试剂盒组成：

成分	规格
双酶一管式qRT-PCR Buffer，2×	750μl
MMLV-Taq Mix	100μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

使用方法：
1.在一干净的无RNase的PCR管中，先加入下列成分(下面只列出样品管的设置情况，用户可自己根据需要设置阳性和阴性对照)：

成分	样品
自备RNA模板(分下面三种情况)	见下
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或体外转录得到的专一RNA	0.01pg-500ng
RNA特异性引物一(自备)	终浓度300nM(注1)
RNA特异性引物二(自备)	终浓度300nM
RNase-free水	补到10μL
双酶一管式qRT-PCR Buffer(2×)	15μl
自备ROX(某些荧光PCR机型需要)	3μL(注2)
MMLV-Taq Mix	2μl

 注1：通常初次使用本试剂时，可用引物浓度300nM进行实验，根据实验结果具体情况，在200～800nM范围内调整引物浓度。引物、待检样品的具体加量用户可以根据实际情况调整，同时增减RNase-free水用量，保证总反应体积不变即可。
 注2：如果使用ABI公司的7500，7700和7900三种型号的荧光PCR仪器，则需用自备的ROX进行Ct值校正。对ABI 7700和7900，ROX的zuì佳浓度为1×(即在每30μl反应体系中加3μl 10×ROX)。对ABI 7500，ROX的zuì佳浓度为0.05-0.1×(每30μL反应体系加0.3μL 10×ROX；也可将10×ROX稀释到1×，然后每个反应体系加入3μL 1×ROX)。ROX会在溶解曲线中产生噪音，因此，如果出现了杂峰，将软件中“Passive Reference Dye”中的“ROX”选项取消打勾，然后重新分析数据。对于iCycler IQ，MJ Opticon，MJ Chromo4，MX3000，MX4000，RotorGene3000，RotorGene 6000和LightCycler 480等型号的荧光PCR仪器，ROX不是必须的，但加入的话也不会影响整个PCR分析。
2. 轻柔混合均匀后放入PCR仪中进行荧光定量RT-PCR。
3. 设定RT-PCR反应条件时，一般将RT的条件设定成42℃ 30分钟，后接94℃变性5分钟，然后进入PCR循环(PCR参数将根据自备引物的Tm值和PCR产物长度由用户自行决定注)、zuì后72℃ 5分钟。并在退火或延长步骤中记录荧光信号。本产品中所含的荧光染料在没结合DNA时，zuì大吸收光谱在471nm，结合DNA时的zuì大吸收光谱在500nm，zuì大发射光谱在530nm。