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PhyZol? 总RNA提取试剂

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基本信息:

  • 发布时间: 2020-05-29
  • 产品名称: PhyZol? 总RNA提取试剂
  • 产品英文名称: RNA Extraction Reagent
  • CAS号: 
  • 产品包装: 50ml
  • 产品价格: ml
  • 有效期: 
  • 品牌: 
  • 产地: 
  • 保存条件: 避光,12个月有效
  • 纯度规格: 99%
  • 产品类别: 试剂

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PhyZol? 总RNA提取试剂

产品描述:

名称 PhyZol? Total RNA Extraction Reagent
规格 
PH1420-50 | 50mL
PH1420-100 | 100mL
存储 
Store@4℃ 避光,12个月有效。
产品简介 
PhyZol?是Phygene自主研发和生产的用于细胞或组织的总RNA提取试剂。PhyZol?采用与Invitrogen TRIzol完全相似的原理和方法,PhyZol?颜色、抽提的方法和步骤亦与Invitrogen TRIzol完全相同。PhyZol?含酚和异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶,保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后,溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA,中间层用乙醇沉淀回收DNA,下层用异丙醇沉淀回收蛋白。
Phygene的PhyZol?总RNA提取试剂适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA,既可用于小量样品(50~100 mg组织、5×106细胞),也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高,可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。
PhyZol?具有以下特点:
①适用范围广;
②操作简单,整个过程1小时内完成;
③纯度高;
④污染少。
自备材料:
1、试剂:无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。
2、耗材: RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中,RNase是导致RNA降解的最主要物质,非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase,移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。
3、仪器:低温高速离心机、低温冰箱。
使用说明 
操作步骤(仅供参考):
1、样品准备
①贴壁细胞:接裂解:直接在培养瓶/皿中加入PhyZol?裂解细胞,每10cm2面积加1ml PhyZol?,用移液器吹打混匀。
胰蛋白酶消化:用无菌PBS洗涤细胞后,加入含有0.05~0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞,当细胞脱离容器壁后,加入含有血清的培养基终止反应,将细胞溶液转移至无RNase的离心管中,5000~6000g离心5 min,收集细胞沉淀,去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净,否则裂解不完全,降低RNA收获率。
②悬浮细胞:无需清洗细胞,直接5000~6000 g离心5 min,收集细胞。每5×106~107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml PhyZol?。
③组织:取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织,50~100mg组织在液氮中充分研磨或者加入1ml PhyZol?研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过PhyZol?体积的10%。研磨要迅速,以1min为佳。
④血液:取0.5~1 ml新鲜或冻存的血液,12000g离心5 min,去除血浆,加入1ml PhyZol?,充分振荡混匀。
2、核酸分离:充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5~10 min后,充分振荡,反复1~3次),将裂解样品或匀浆液室温放置5~10 min,使核蛋白与核酸完全分离。
3、样品分层:加入0.2 ml氯仿/1ml PhyZol?,剧烈振荡15 s,室温放置2~3 min。置于4℃离心机,12000 g离心10~15 min。上层为水相,中间层和下层为有机相,RNA在上层水相。
4、沉淀RNA:吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染),加入等体积异丙醇混匀,室温放置15~20 min。12000 g 4℃离心10 min,离心后管侧或管底形成胶状沉淀,弃上清。
5、洗涤RNA:加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml PhyZol?洗涤沉淀,室温放置5~10 min,7500g 4℃离心5 min,弃上清。室温干燥5~10 min,不宜过分干燥,否则RNA难以溶解。
6、溶解RNA:加入30~50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA,-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品,沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。
分析与定量:
1、测定样品在260 nm和280 nm的吸收值确定RNA的质量。按1OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在1.8~2.2视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。
2、进行甲醛变性琼脂糖电泳,确定RNA的完整性和污染情况。
3、核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。
应用举例 
分别利用本品PhyZol?和Trizol从胶质细胞中提取Total RNA,利用1%琼脂糖凝胶电泳检测,所提取RNA具有较好完整性, OD值均>1.9。
注意事项 
1、样品保存:加入PhyZol?混匀后,样品可在-70℃放置1~2月;RNA样品可以在70%酒精中-70℃保存2~4周:如果需要长期保存,应置于超低温冰箱中保存。
2、PhyZol?是强腐蚀性物质,污染皮肤或眼睛后,立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
3、PhyZol?可常温运输,建议保存4℃保存。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 
常见问题         可能原因
A260/ A280<1.6   抽提得到的RNA沉淀未完全溶解。
                        水相中混有有机相,从而存在蛋白质和DNA污染。
                        RNA样品用水而不是TE溶解。低离子浓度和低pH条件下,A280值会偏高。
                        样品匀浆时加的PhyZol?试剂太少,RNA与蛋白质、DNA未能完全分离。
                        匀浆后样品未在室温放置或者放置时间太短,RNA与核蛋白未完全解离。
DNA污染          样品中含组织溶剂(如乙醇等)或碱性溶液,致水相减少或pH升高。
                        样品匀浆时加入的试剂体积太少。如果存在DNA污染,可用DNA清除剂去除。
                        水相中混有有机相,从而存在蛋白质和DNA污染。
RNA产量低          样品裂解或匀浆处理不彻底,RNA没有被完全释放出来。
                        得到的RNA沉淀未完全溶解。
                        抽提的RNA中含有RNase。
RNA降解           组织或细胞不新鲜,样品没有及时被液氮冻存,导致组织或细胞中的RNA降解。
                        溶液或离心管未经RNase free处理,RNase的污染导致RNA被降解。
                        细胞在胰蛋白酶消化时间过长,导致未加PhyZol?前RNA已经部分降解。
                        电泳时使用的甲酰胺pH小于3.5,导致RNA发生酸解。
蛋白和多糖污染         水相中混有有机相,从而带有蛋白质和DNA。
                        样品中蛋白、多糖含量高或样品量太大,细胞未裂解完全。
*Important Note: This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
我们所提供的产品仅供科研使用,不得用于临床诊断、治疗、食品或者化妆品等用途!在您向我们订购产品之时,表明您已经知晓我们的产品仅做科研用途,并遵守法律法规!

PhyZol? 总RNA提取试剂生产厂家
  • 供应商联系方式:
  • 联系人 代翔
  • 公司名称 武汉卡诺斯科技有限公司
  • 电话 027-83238443
  • 手机 15327105076
  • 传真 027-83238443
  • 邮箱 926254131@qq.com
  • 地址 武汉市东西湖区吴家山临空港经济开发区
  • 公司简介:
  • 武汉卡诺斯科技有限公司旗下子公司武汉富鑫远科技有限公司在污水治理及水处理产品方面也取得了长足的发展,承包多个污水处理项目,PAM、PAC畅销全国多个省市自治区,在国内形成了稳定健全的销售网络体系。公司于东西湖区、舵落口、盘龙城设有大型仓库,长期保持充足的货源库存。与宜昌宜化、巴陵石化、应城双环、新都化工、雪花啤酒、百威啤酒、武钢、冶钢、鄂钢、葛化、鄂西化工厂、广济药业等大型企业有长期业务往来。_ 本公司始终奉行“守约重义,精诚服务,持续改进,为顾客提供优质产品”的质量方针,立志于向客户提供高质量的产品及优质的服务。真诚欢迎海内外客户来洽谈贸易,合作经营,共创辉煌!
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