根皮素脂质体，纳米包裹根皮素，水溶性根皮素，根皮素纳米乳

根皮素脂质体，纳米包裹根皮素，水溶性根皮素，根皮素纳米乳

Liposomal Phloretin,Water Soluble Phloretin,NanoActive Phloretin, Phloretin NanoEmulsion

【中文名称】：根皮素

【英文名称】：Phloretin

【CAS号】：60-82-2

根皮素是一种具有抗菌、抗炎作用的天然查尔酮。本研究探讨了根皮素对丙酸杆菌所致皮肤感染的抗痤疮活性及潜在的靶蛋白的抗炎抗菌作用。根皮素能有效地抑制人角质形成细胞中的丙酸杆菌和丙酸杆菌诱导的toll样受体（tlr）2介导的炎症信号传导。分泌型胚胎碱性磷酸酶检测证实，根皮素的抗炎活性与丙酸杆菌刺激的TLR2介导的NF-B信号通路有关。根皮素显著降低磷酸化c-jun N末端激酶（JNK）的水平，显示1.184 × 10-5/m的结合亲和力。我们还发现，根皮素与参与脂肪酸合成的丙酸杆菌-酮酰基载体蛋白（acp）合酶III（kas III）的微极性结合。构象敏感的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳显示根皮素降低KASⅢ介导的3-酮酰基-ACP产量超过66%。一项对接研究表明，根皮素与JNK1和KAS III的活性位点相互作用，表明它们参与了链霉菌诱导的炎症，并可能成为根皮素抗菌活性的靶点。这些结果表明，根皮素可能有助于预防或治疗痤疮感染。

1.引言

类黄酮是最丰富的天然食品，如蔬菜、水果、香料、坚果、红酒和茶。这一大类次生植物代谢产物包括6000多种已知化合物，具有许多生物和药理作用，包括抗炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗氧化活性。膳食多酚因其在疾病预防中的潜在应用而受到广泛研究。根皮素[3-（4-羟基苯基）-1-（2,4,6-三羟基苯基）-1-丙酮]是一种二氢查尔酮，主要存在于苹果和草莓中，呈游离和糖苷形式，已知具有抗氧化、抗癌、抗炎和抗菌活性。

寻常痤疮是皮脂腺单位最常见的皮肤疾病，以炎症和非炎症性病变为特征，主要发生在面部、颈部和胸部皮肤，是由厌氧革兰氏阳性丙酸杆菌感染所致。（根据分类分类，最近更名为表皮细菌丙酸杆菌（c.acnes）。寻常痤疮病变包括丘疹、粉刺、结节和囊肿。对痤疮炎症的免疫应答在寻常痤疮发病中起着关键作用。许多类型的药物被用于治疗这种疾病，包括外用药物、口服抗生素和口服激素疗法。最近，由于对现有抗生素的抵抗力和副作用的增加，公众对天然产品治疗痤疮的兴趣大大增加。丙酸杆菌通过诱导单核细胞产生促炎性细胞因子，如肿瘤坏死因子（TNF）-、白细胞介素（IL-1）和IL-8，促进痤疮的炎症性质。据报道，痤疮丙酸杆菌能激活toll样受体（tlr）2，从而介导痤疮丙酸杆菌诱导的原代人单核细胞产生IL-12和IL-8，或巨噬细胞产生IL-6。

暴露于痤疮刺激角质形成细胞单层产生IL-1、TNF和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子。据报道，根皮素的抗痤疮作用包括在痤疮丙酸杆菌诱导的炎症信号上调过程中，环氧合酶2和前列腺素E2的表达减弱。在我们之前的研究中，研究了根皮素对PAM3cys-Ser-（Lys）4（PAM3CSK4）刺激的人胚胎肾（HEK）293-HTLR2细胞的影响。研究结果证实，根皮素对TLR2/1异二聚化的抑制作用与已知的TLR2抑制剂cu-cpt22的抑制作用相当。Western blotting结果表明，根皮素能有效抑制PAM3CSK4诱导的TLR2和NF-B p65表达，并与TLR2–TLR1界面结合。然而，有关根皮素对痤疮炎症作用的具体机制和靶蛋白尚未阐明。

在这个研究中，我们调查了根皮素对于不同菌株的丙酸杆菌产生的抗炎作用。我们还研究了根皮素对分泌型胚胎碱性磷酸酶（SEAP）测定、Western印迹和构象敏感的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）抑制痤疮引起的炎症的靶蛋白的抑制作用，并对其进行了研究。利用荧光猝灭和分子对接分析，菲洛丁与靶蛋白之间的相互作用。我们的研究结果为根皮素作为一种新型有效的抗痤疮药物的潜在应用提供了依据。

2.结果

2.1  抗菌活性

我们评估了与作为阳性对照的三氯生和过氧化苯甲酰相比，根皮素对革兰氏阴性和阳性菌株的抗菌活性。三氯生是一种著名的抗菌和抗真菌剂，用于商业产品，如洗发水和牙膏。美国食品药品监督管理局最近禁止将其用于抗菌产品，如肥皂。过氧化苯甲酰是一种局部痤疮剂，可引起皮肤反应，如干燥、瘙痒和刺激；因此，许多研究集中在寻找这种潜在危险化合物的替代品。根皮素对标准革兰阴性和阳性菌株的抗菌活性较低（表1）。三氯生对革兰氏阴性和阳性标准菌株有很强的抑制作用，MIC值在0.5-1 m之间，而过氧化苯甲酰则有很强的抑制作用。未对任何试验菌株产生抗菌作用。

我们评估了根皮素对四种不同种类的丙酸杆菌菌株的活性，发现它对丙酸杆菌菌株KCTC3220、KCTC5527和KCTC5933（MIC=16 m）具有有效作用，对KCTC3114菌株的作用较弱（MIC =32 m）。三氯生对所有四种毒株都有很强的抑制作用（MIC=8或16 m），而过氧化苯甲酰的抑制作用则要小得多（MIC=64 m）。这些结果表明，根皮素对痤疮有很强的选择性抗菌活性，对根皮素的抗菌活性强于标准的抗痤疮剂过氧化苯甲酰，表明根皮素可作为抗痤疮剂使用。

2.2  哺乳动物细胞毒性

我们使用细胞计数试剂盒8（CCK-8）研究了根皮素对HACAT人角质形成细胞和人肾胚胎（HEK）293细胞的细胞毒性。用50 M的phloretin处理未改变hacat细胞的活力。在HEK293细胞中，浓度超过25 m时活力变化很小，但剂量-反应曲线显示，在两种细胞类型中，phloretin的半抑制浓度（IC50）值均大于50 m。三氯生对细胞有很强的毒性，即使在非常低的浓度下，Hacat细胞的IC50值为18M。

3.结论

与广泛使用的抗痤疮剂过氧化苯甲酰相比，根皮素对痤疮菌株的活性更强。在这项研究中作为阳性对照的三氯生，由于其细胞毒性现在被禁止在肥皂中使用，尽管它以前是许多清洁和化妆品中常用的抗菌成分。最近一项对小鼠的研究表明，三氯生削弱了心肌和骨骼肌的收缩力。我们发现，三氯生和过氧化苯甲酰对人Hacat细胞和Hek293细胞都有毒性，而50 μM根皮素对细胞活力没有显著影响。因此，在消费品中，根皮素可以作为三氯生的天然有效替代品。