Human IL-4 ELISA Kit

      碧云天的Human IL-4 ELISA Kit (Human Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素4酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-4的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为7.8pg/ml，与人IL-4 Sr，小鼠IL-4等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
      IL-4即白细胞介素-4(简称白介4)，是一种多功能细胞因子，主要由活化的T淋巴细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞产生。IL-4因为糖基化的不同，分子量从15-19kDa不等。在不同类型的细胞中，IL-4参与调节多种细胞的免疫应答功能。IL-4参与B细胞的激活过程，它能诱导处于静息期的B细胞上Ⅱ型MHC(主要组织相容复合体)分子的表达，增强IgE与IgG的表达和分泌，还能调节淋巴细胞和单核细胞上对IgE低亲和FC受体的表达。IL-4也是前体辅助T细胞向Th2细胞分化的重要调节因子。此外，IL-4在体内外均表现出了一定的抗肿瘤活性，IL-4在机体中的遗传变异可导致缺血性中风，脑血管意外或脑梗塞等疾病。
      人IL-4前体蛋白(包含153个氨基酸)剪切掉24个氨基酸的信号肽后得到成熟的人IL-4。成熟的人IL-4与小鼠IL-4具有50%的氨基酸同源性，两个物种的IL-4不存在交叉反应性。同时人IL-4与人IL-13具有大约30%的氨基酸同源性，并且具有部分重叠的生物学活性。
      特定细胞表面的受体复合物参与调节IL-4生物学功能。IL-4的受体主要有两种类型，种类型的IL-4功能受体复合物由IL-4结合亚基(IL-4 R)和特定的γ_c链组成，该γ_c链同时也是IL-2,IL-7,IL-9和IL-15受体复合物的组成部分。第二种类型的IL-4功能受体复合物是由IL-4 R和IL-13 Rα组成，尽管IL-4 R并不直接与IL-13结合，但当其与IL-13 R α形成复合物后，该复合物同时也对IL-13具有很高的亲和力。此外，除了细胞膜表面的IL-4受体，在人及小鼠的体液和小鼠细胞培养上清液中均检测到了游离IL-4受体的存在。
      IL-4先与IL-4 Rα结合形成IL-4/IL-4 Rα复合物，该复合物随后再与辅助受体链γ_c或IL-13 R 结合。当IL-4与受体结合后，依靠胰岛素受体底物IRS2和Shc蛋白激活Ras/MEK/Erk通路，实现促进细胞有丝分裂的作用。此外，IL-4与IL-4 Rα的结合还能够诱导JAK及STAT的磷酸化，磷酸化后的STAT形成二聚体进入细胞核，对靶基因的表达进行调控，同时磷酸化后的JAK还能够实现对PL3K/AKT通路的激活。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中人IL-4的浓度，其原理见图1。人IL-4特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的人IL-4会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗人IL-4抗体后，生物素化抗人IL-4抗体与人IL-4结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。人IL-4浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中人IL-4浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。