Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒

      Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit)是用藻红蛋白(Phycoerythrin, 简称PE)标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
      本试剂盒检测的是红色荧光，因此在待检测的细胞已经表达GFP等绿色荧光蛋白的情况下，特别适合使用本试剂盒检测细胞凋亡。PE可以被495nm、545或564nm的激发光所激发，发出峰值为575nm的荧光。(参考图1)

图1.Phycoerythrin的荧光光谱

      Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白，参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
      Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine，简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。对于坏死细胞，由于细胞膜的完整性已经丧失，Annexin V-PE可以进入到细胞浆内，与位于细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸结合，从而也使坏死细胞呈现红色荧光。
      用带有红色荧光的荧光探针PE标记的Annexin V，即Annexin V-PE，就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
      正常细胞不会被Annexin V-PE所染色，凋亡细胞和坏死细胞都会被Annexin V-PE所染色。如果希望进一步区分凋亡和坏死细胞，可以使用其它细胞凋亡检测试剂盒(如C1062 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒)进行检测。使用本试剂盒检测细胞凋亡的效果参考图2。

图2. Annexin V-PE的染色效果图。图中红色荧光为Annexin V-PE染色阳性细胞，蓝色荧光为Hoechst 33342标记的所有细胞的细胞核。Vehicle组为阴性对照，Annexin V-PE染色非常弱，L-929细胞处于正常状态；TSZ组为阳性对照，L-929细胞用TSZ处理4小时。TSZ为TNFα、SM-164和Z-VAD-FMK组成的细胞坏死诱导试剂(C1058)。本图仅作参考，不同的样品不同的检测条件，实际获得的结果可能有较明显的差别。
      本试剂盒小包装C1065S可以检测20个样品，中包装C1065M可以检测50个样品，大包装C1065L可以检测100个样品。
包装清单：

保存条件：
      4℃保存，半年有效。-20℃保存，一年有效。AnnexinV-PE需避光保存。
注意事项：
      尽管经测试AnnexinV-PE反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-PE，最终导致染色失败。
      由于细胞样品的差异、凋亡和坏死程度的差异，可根据预实验结果优化Annexin V-PE的使用量，进行适当增加或减少。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。