G6P检测试剂盒(WST-8法)

      碧云天的G6P检测试剂盒(WST-8法) (G6P Assay Kit with WST-8)是一种高灵敏度的基于WST-8的显色反应，通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中G6P含量的检测试剂盒。
      WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其他MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
      本试剂盒使用便捷。使用细胞、组织等的裂解液即可进行检测，无需分离纯化细胞、组织或其它样品中的G6P。
      本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽。可以检测含量低至20μM (1nmol)的G6P，在20μM (1nmol)至500μM (25nmol)之间呈现良好的线性关系。
      G6P (Glucose-6-phosphate，葡萄糖-6-磷酸，又称6-磷酸葡萄糖)是葡萄糖的第6位碳上的羟基在己糖激酶催化下发生磷酸化后生成的分子，是细胞中常见的糖代谢小分子，参与糖酵解(glycolytic pathway)和磷酸戊糖(pentose phosphate pathway)等生化途径。在糖酵解的步反应中，葡萄糖被己糖激酶催化生成葡萄糖-6-磷酸，然后通过磷酸葡萄糖异构酶的催化形成果糖-6-磷酸，以继续糖酵解的其它步骤；而在戊糖磷酸途径中，葡萄糖-6-磷酸是其个底物，该过程也是生成NADPH的主要途径。除了这两个代谢途径外，葡萄糖-6-磷酸也能转化形成糖原或淀粉而被存储起来。
      本试剂盒可检测样品中的G6P含量，具体原理如下：葡萄糖-6-磷酸(G6P)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PDH)的作用下氧化生成6-磷酸葡萄糖酸内酯(6-phosphogluconate, 6-PG)，在这一反应过程中NADP+被还原为NADPH，生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的formazan，在450nm左右有吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中总的G6P的量呈正比关系。WST-8法检测G6P的原理参考图1。

      本试剂盒适用于检测细胞、组织以及其它适当样品中G6P的含量。
      本试剂盒可以测定100个样品。

保存条件：
      -20℃保存，一年有效。显色液(S0185-3)须-20℃避光保存。
注意事项：
      经检测本试剂盒中的酶混合液室温存放72小时或反复冻融5次不影响其酶活性。
      由于G6P提取液略显粘稠，以该提取液作为稀释液时，无论对标准品还是样品进行稀释，在稀释过程中务必确保稀释均匀，否则易造成实验数据产生较大波动。
      在样品加样和混匀过程中，须尽量避免产生气泡，以免影响最终的吸光度测定。
      如果不能非常严格地控制反应温度和反应时间，每次检测都需要设置标准曲线。
      如果样品溶液中G6P浓度过高或过低，不在试剂盒的线性检测范围内时，可适当调整样品或者提取液的用量。
      尽量使用新鲜样品进行检测，冻存或反复冻融的细胞或组织样品可能对结果有一定影响。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。