Mouse IL-4 ELISA Kit

      碧云天的Mouse IL-4 ELISA Kit (Mouse Interleukin-4 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白细胞介素4酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-4的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为4.5pg/ml，与人IL-4、IL-4 sR等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
      IL-4即白细胞介素-4(简称白介4)，又名B细胞刺激因子-1，其分子量大约在18-20kDa，在免疫应答中具有多种效应功能。成熟的小鼠IL-4是由140个氨基酸减掉20个氨基酸的信号肽所剩余的120个氨基酸组成。该细胞因子N端包含3个潜在的糖基化位点，能够形成3个链内二硫键，最终形成4-α螺旋结构。成熟的小鼠IL-4分别与人IL-4和大鼠IL-4具有43%和63%的氨基酸同源性，三者之间并无交叉反应性。Th2细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞、NKT、γδT细胞和嗜酸性粒细胞均能够分泌IL-4。
      IL-4能够促进细胞的增殖和存活，促进小鼠B细胞表面免疫球蛋白的转化，引发肥大细胞嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的趋药性，诱导CD4⁺细胞向Th2表型分化，还能促进上皮细胞的增殖和活化。在肿瘤免疫中，IL-4也发挥了重要作用。在早起实验中研究者发现IL-4展现出了强大的抗肿瘤能力，这可能是由于IL-4具有抗血管生成能力和激活CD8⁺ T细胞的能力。然而，新的研究结果却表明IL-4是一种肿瘤促进分子，这一结果可能是因为在IL-4的作用下，肿瘤细胞内抗凋亡分子表达上升，同时IL-4作用于肿瘤相关巨噬细胞，诱导组织蛋白酶的分泌，促使肿瘤细胞发生迁移。
      IL-4首先与IL-4 Rα亚基结合，随后该复合物与辅助受体链γ_c或IL-13 Rα结合。在JAK的作用下，受体C端发生磷酸化，随后形成二聚体。这一过程导致STAT6被募集并发生磷酸化，磷酸化的STAT6发生构象改变，形成二聚体，随后转移至细胞核内，对多种靶基因的转录进行调控激活。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中小鼠IL-4的浓度，其原理见图1。小鼠IL-4特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的小鼠IL-4会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗小鼠IL-4抗体后，生物素化抗小鼠IL-4抗体与小鼠IL-4结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。小鼠IL-4浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中靶蛋白浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。