| 产品编号 |
产品名称 |
产品包装 |
产品价格 |
| D2905-100μg |
pET-N-His-TEV |
100μg |
1086.00元 |
pET-N-His-TEV是一种用于表达N端含有His标签(His tag)的原核表达质粒。本质粒N端His标签后含有TEV酶切位点，可通
过TEV Protease (P2307/P2308)切除N端的His标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面，带有一个His标签的编码序列，含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有His标签的目的蛋白。
本载体在N端His标签与多克隆位点之间含有TEV蛋白酶(TEV Protease)识别的七肽序列ENLYFQG，对应的核酸序列为
GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白纯化后用TEV蛋白酶切除N端His标签。TEV蛋白酶酶切发生在七肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除His标签的时候目的蛋白的N端会留下一个额外的氨基酸残基G。
通常可以采用如BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-His-TEV质粒的主要信息如下：
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Feature Nucleotide
|
Position
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|
f1 origin
|
12-467
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Kanamycin resistance ORF
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563-1645
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PBR 322 origin
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2084
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LacI coding sequence
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3518-4597
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|
T7 promoter
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4988-5004
|
|
His tag coding sequence
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5079-5096
|
|
TEV Protease recogniton site sequence
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5097-5117
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Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
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5118-5165
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T7 Terminator
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5251-5297
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pET-N-His-TEV质粒(5304bp)的图谱如下：
pET-N-His-TEV的多克隆位点的详细图谱如下：
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rbs
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NdeI
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His tag
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5052
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TAACTTTAAG
|
AAGGAGATAT
|
|
CATCATCATC
|
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|
|
ATTGAAATTC
|
TTCCTCTATA
|
|
GTAGTAGTAG
|
|
|
TEV
|
PstI
|
|
|
|
|
EcoRI EcoRV SalI
|
|
5102
|
CCTGTACTTC
|
CAAGGGGGAT
|
CCAAGCTTCT
|
GCAGGAATTC
|
GATATCGTCG
|
|
|
GGACATGAAG
|
GTTCCCCCTA
|
GGTTCGAAGA
|
CGTCCTTAAG
|
CTATAGCAGC
|
|
|
BglII XhoI
|
|
5152
|
ACAGATCTCT
|
CGAGTGAGAT
|
CCGGCTGCTA
|
ACAAAGCCCG
|
AAAGGAAGCT
|
|
|
TGTCTAGAGA
|
GCTCACTCTA
|
GGCCGACGAT
|
TGTTTCGGGC
|
TTTCCTTCGA
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pET-N-His-TEV中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-TEV)包括：
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AatII
|
Acc65I
|
AflII
|
AgeI
|
AhdI
|
AleI
|
AscI
|
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AvrII
|
BaeI
|
BbvCI
|
BfuAI
|
BmgBI
|
BmtI
|
BsaI
|
|
BseRI
|
BsiWI
|
BspMI
|
BsrGI
|
BstBI
|
Bsu36I
|
CspCI
|
|
DraI
|
EagI
|
Eco53kI
|
FseI
|
KpnI
|
MfeI
|
MscI
|
|
NcoI
|
NheI
|
NotI
|
PacI
|
PmeI
|
PmlI
|
PspXI
|
|
RsrII
|
SacI
|
SacII
|
SbfI
|
ScaI
|
SexAI
|
SfiI
|
|
SnaBI
|
SpeI
|
SrfI
|
StuI
|
SwaI
|
ZraI
|
|
pET-N-His-TEV中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-His-TEV once)包括：
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DraIII
|
CAC,NNN`GTG
|
242
|
BssHII
|
G`CGCG,C
|
3831
|
|
PsiI
|
TTA|TAA
|
370
|
ApaI
|
G,GGCC`C
|
4035
|
|
PvuI
|
CG,AT`CG
|
943
|
PspOMI
|
G`GGCC,C
|
4035
|
|
AsiSI
|
GCG,AT`CGC
|
943
|
NmeAIII
|
GCCGAG(N)19,NN`
|
4041
|
|
TspMI
|
C`CCGG,G
|
1067
|
BstEII
|
G`GTNAC,C
|
4060
|
|
XmaI
|
C`CCGG,G
|
1067
|
MluI
|
A`CGCG,T
|
4242
|
|
SmaI
|
CCC|GGG
|
1069
|
BstAPI
|
GCAN,NNN`NTGC
|
4563
|
|
NruI
|
TCG|CGA
|
1286
|
SphI
|
G,CATG`C
|
4771
|
|
AcuI
|
CTGAAG(N)14,NN`
|
1597
|
SgrAI
|
CR`CCGG,YG
|
4923
|
|
AlwNI
|
CAG,NNN`CTG
|
1729
|
SgrAI
|
CR`CCGG,YG
|
4923
|
|
BssSI
|
C`ACGA,G
|
1968
|
XbaI
|
T`CTAG,A
|
5034
|
|
PciI
|
A`CATG,T
|
2141
|
NdeI
|
CA`TA,TG
|
5074
|
|
SapI
|
GCTCTTCN`NNN,
|
2258
|
BamHI
|
G`GATC,C
|
5118
|
|
BspQI
|
GCTCTTCN`NNN,
|
2258
|
HindIII
|
A`AGCT,T
|
5124
|
|
BstZ17I
|
GTA|TAC
|
2374
|
PstI
|
C,TGCA`G
|
5130
|
|
Tth111I
|
GACN`N,NGTC
|
2399
|
EcoRI
|
G`AATT,C
|
5136
|
|
PflFI
|
GACN`N,NGTC
|
2399
|
EcoRV
|
GAT|ATC
|
5144
|
|
PpuMI
|
RG`GWC,CY
|
3136
|
SalI
|
G`TCGA,C
|
5148
|
|
FspI
|
TGC|GCA
|
3164
|
BglII
|
A`GATC,T
|
5154
|
|
BglI
|
GCCN,NNN`NGGC
|
3182
|
XhoI
|
C`TCGA,G
|
5160
|
|
PshAI
|
GACNN|NNGTC
|
3401
|
PaeR7I
|
C`TCGA,G
|
5160
|
|
HpaI
|
GTT|AAC
|
3740
|
BlpI
|
GC`TNA,GC
|
5221
|
pET-N-His-TEV质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′
pET-R primer (5218-5237): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-His-TEV的全序列信息：D2905 pET-N-His-TEV.txt。
不同原核表达质粒的比较和选择，以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页：
http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单：
|
产品编号
|
产品名称
|
包装
|
|
D2905-1μg
|
pET-N-His-TEV
|
1μg
|
|
D2905-100μg
|
pET-N-His-TEV
|
100μg
|
|
—
|
说明书
|
1份
|
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
