pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)

      pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下，可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。
      在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时，pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光，在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。
      pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分：(1)用于插入目的基因的pFastBac载体，目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达；(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid，用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座，从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因，从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后，提取重组的bacmid转染昆虫细胞，可以产生重组杆状病毒，并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞，就可以大量表达纯化目的蛋白了。
      pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下：

      pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下：

      pFastBac1-EGFP的详细图谱如下：

      pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：

      pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：

      pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考碧云天的网站上该质粒的信息。
      pFastBac1-EGFP质粒使用碧云天研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。

      图1. pFastBac1-EGFP质粒转化DH10Bac，获得的重组bacmid用碧云天生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞4天后的效果图。左侧为明场照片，右侧为荧光照片。

      关于昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化的详细介绍，请见如下网页： http://www.beyotime.com/support/insect cell.htm。
包装清单：

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      -20℃保存。
注意事项：
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。