Rat IFN-γ ELISA Kit

      碧云天的Rat IFN-γ ELISA Kit (Rat Interferon-γ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠干扰素-γ酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测大鼠血清、血浆、细胞或细胞培养上清液中的IFN-γ的ELISA试剂盒。
      本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。多次重复检测结果表明，最小检出量为29pg/ml，与大鼠GDNF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、PDGF-BB、IL-10，人IFN-γ，小鼠IFN-γ没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
      IFN-γ即干扰素-γ，也称之为II型干扰素，是细胞因子超家族中IFN家族的重要成员，具有广泛的生物学功能，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、调控细胞增殖和分化等。在许多细胞中，IFN-γ可以诱导细胞因子的产生及对多种膜蛋白(包括MHC class I、MHC class II、Fc受体、细胞粘附分子、B7家族抗原)表达的上调，IFN-γ同时也是巨噬细胞效应强有力的催化剂。IFN-γ引导B细胞的合成、类别转换及免疫球蛋白的分泌。IFN-γ通过抑制Th2细胞的分化和刺激Th1细胞的发育影响辅助性T细胞表型的发育。IFN-γ在诸如自身免疫和动脉粥样硬化这样的炎性疾病进程中发挥重要作用。
      具有生物活性的IFN-γ是由2个20-25kDa糖基化亚基以非共价键连接构成的同源二聚体。成熟大鼠的IFN-γ与小鼠的IFN-γ氨基酸同源性为86%，与牛、犬、棉鼠、马、猫科动物、猪、人和猕猴的氨基酸同源性为37-45%。IFN-γ首先与跨膜IFN-γ RI (α亚基)结合，然后与跨膜IFN-γ RII (β亚基)作用形成由2个α亚基和2个β亚基构成的功能性受体复合物。受体复合物中的IFN-γ RII能够增强配体结合亲和力及信号转导效率。
      在炎症状态下很多细胞都能产生IFN-γ，包括树突状表皮细胞/γδ T细胞、角化细胞、外周血γδ T细胞、肥大细胞、神经细胞、CD8⁺ T细胞、巨噬细胞、B细胞、中性粒细胞、NK细胞、CD4⁺ T细胞和睾丸精子。
      IFN-γ与受体结合后激活JAK1和JAK2，活化后的JAKs协助IFN-γ R与STAT1结合，在JAKs的作用下STAT1发生磷酸化并形成同源二聚体，随后该聚合物进入细胞核调控相关基因的表达。SOCS能够通过抑制JAK和STAT的磷酸化从而抑制IFN-γ的信号传递，影响其功能。
      本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法(Sandwich ELISA)检测样品中大鼠IFN-γ的浓度，其原理见图1。大鼠IFN-γ特异的单克隆捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标准品或样品时，其中的大鼠IFN-γ会与捕获抗体结合。当加入生物素化的抗大鼠IFN-γ抗体后，生物素化抗大鼠IFN-γ抗体与大鼠IFN-γ结合，形成夹心的免疫复合物。随后加入辣根过氧化物酶标记Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素与链霉亲和素(Streptavidin)可以特异性地结合，因此链霉亲和素连接的HRP就会与夹心的免疫复合物连接起来而被固相捕获。最后加入显色剂TMB溶液，固相捕获的辣根过氧化物酶就会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测450nm处的吸光度值就能实现定量检测。大鼠IFN-γ浓度与A450值呈正比，通过绘制标准曲线，对照样品吸光度值，即可计算出样品中IFN-γ浓度。

图1. 双抗体夹心ELISA原理图。

      一个包装的本试剂盒，包括标准品检测，可以进行96次检测。
包装清单：

保存条件：
      除标准品外，4℃保存6个月内有效。标准品4℃保存，1-2周内有效，-20℃保存6个月内有效。
注意事项：
      由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注为准。
      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶，请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
      为保证标准品的精确性，标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用。
      TMB溶液请勿接触氧化剂和金属，否则容易失效。
      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体积的误差。
      不宜混用不同批号的试剂盒组份，每批次试剂盒均经过独立测试。
      充分混匀对保证反应结果的精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板，以保证混匀。
      本试剂盒很多操作在室温进行，要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致最终检测到的吸光度显著下降。
      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度。
      加样过程中须避免气泡的产生。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。