人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒（埃泽思生物AC-1001029）

                             人间质干细胞诱导成脂分化试剂盒

产品基本信息

产品简介

人间质干细胞成脂诱导分化试剂盒是埃泽思生物（Applied Cell^TM）自主研发的一款用于人间质干细胞诱导分化成脂的试剂盒，可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成脂分化。本产品仅限于科学研究，不能用于临床诊断、治疗，以及其他用途。

四、产品特性

l 诱导分化程序简单便捷。

l 诱导成脂细胞效率高。

五、操作方法

1.         相关材料

•    Xeno-Free 人间充质干细胞培养基（Applied Cell^®:AC-1001003）

•    人间充质干细胞成脂分化试剂盒（Applied Cell^®:AC-1001029）

•    成脂检测染液（Applied Cell^®:AC-1001022）

•    细胞消化液（Applied Cell^®:AC-1001024）

•    磷酸盐缓冲液(1×) （Applied Cell^®: Cat.AC-1001037）

2.         实验准备

人间充质干细胞成脂分化培养基的配制

2.1.     在 2-8℃解冻人间充质干细胞成脂分化添加剂，轻晃摇匀；

2.2.     随后将添加剂加入到人间充质干细胞成脂分化基础培养基中（10ml 添加剂与 90mL 基础培养基彻底混合）混匀，即为人间充质干细胞成脂分化培养基。人间充质干细胞成脂分化培养基可在2-8℃稳定储放 2 周。

注意：人间充质干细胞脂肪维持添加剂只能在 2-8℃解冻，待添加剂加入到培养基以后，请用培养基润洗添加剂瓶 1-2 次，因添加剂量较少可防止添加剂粘附在试管壁上造成损失。

3.         实验操作

诱导成脂（以 6 孔板为例）

3.1.     将传代或复苏冻存的人间充质干细胞接种到 6 孔板上，密度为 2×105 -3×105 cells/cm2 或 2× 105 -3×105 cells/孔，置于 37℃，5% CO2 培养箱中培养；

3.2.     当人间充质干细胞融合度达到 80-90%时，开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 Xeno-Free 人间充质干细胞培养基，每孔加 1ml 预热 PBS 清洗一次，吸掉 PBS，加入 2 ml 人间充质干细胞成脂分化培养基，以此记为第 0 天；

注意：人间充质干细胞成脂分化培养基使用前需预热至 37℃。

3.3.     每 1-2 天更换人间充质干细胞成脂分化培养基；

3.4.         第 5-6 天可以看到少量脂滴；

3.5.     第 9-14 天待脂肪滴颗粒成熟即可进行拍照，染色。（根据情况诱导时间可适当延长）

注意：①培养基每 1-2 天换液。由于随着脂肪细胞的成熟，pH 的降低会观察到培养基变黄。pH 从 7 降到 6.5，细胞增殖会变慢。pH 在 6.5 到 6 时，细胞活力会降低。所以诱导后期， 需要每天换液。

②换液时尽量不使培养基变干，培养基变干会降低细胞层对培养皿表面的粘附。

③细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比，年轻供体来源    的细胞的分化能力更强。

4.         成脂检测染液染色

4.1.     每 6ml 成脂染液加入 4ml 蒸馏水制成染色工作液，混匀室温放置 5-10 分钟。加入蒸馏水后，染液会有片状结晶析出，可用直接使用或滤网过滤除掉结晶。

4.2.     脂肪诱导分化结束后，吸掉原有培养基，用 1×PBS 冲洗 1-2 次。每孔加入适量细胞固定液， 固定 20 min。

4.3.     吸掉细胞固定液，用 1×PBS 冲洗 2 次。，加入适量染色工作液，使染液完全覆盖脂肪滴，室温染色 15min。

4.4.     吸掉染色工作液，用 1×PBS 冲洗 2-3 次。

4.5.     将培养板置于显微镜下观察脂滴染色效果，拍照。

注意：染色后显微镜观察，及时拍照。如果时间过长，脂肪滴会发生破裂。