Serum-Free干细胞冻存液

Serum-Free干细胞冻存液

产品基本信息

产品简介

Serum-Free干细胞冻存液是埃泽思生物（Applied Cell^TM）自主开发的一款无血清、无需程序降温的干细胞冻存液，适用于人多能干细胞（hES/hiPS）的冻存。本产品生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。

产品特性

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• 安全：无外源蛋白成分，大大降低各类病毒、霉菌和支原体等的污染风险。

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• 稳定：全程无血清生产，批次间差异小。

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• 高效：冻存细胞复苏率高于90%。

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• 简单：即用型产品，且无需程序降温可直接-80℃过夜后转移至液氮中长期保存。

产品内容

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人多能干细胞培养基（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-1001000）

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即用型基质胶（Applied Cell^TM: Cat. no. AC-1001007）

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人ES细胞（Applied Cell^TM: Cat. no.AC-2001002）

操作方法

细胞冻存

1.1  准备对数期生长的干细胞，加入人多能干细胞消化液（AC-1001008）消化3~5 min，用2mL人多能干细胞培养基（AC-1001000）制备成细胞悬液；

1.2  1000rpm 3min离心，弃上清，用1.5-2mL Serum-Free干细胞冻存液重悬细胞，细胞密度1×10⁶~1×10⁷ /mL；

1.3 转移至冻存管中，无需程序降温，直接将待冻存细胞置于 -80℃过夜，后转移至液氮中长期保存，冻存时注意直立放置冻存管；

细胞复苏

2.1  基质胶包被培养板：取出6孔板/12孔板，每孔内加入1 mL/0.5 mL即用型基质胶（AC-1001007），轻轻晃动6孔板/12孔板使基质胶完全覆盖皿底，置于37℃培养箱中孵育1h~2h，实验前拿出并置于超净工作台/生物安全柜中室温下平衡20min。如果暂时不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 储存，并于1周内使用。

注意：①一支冻存的干细胞的数量在1×10⁶cells/mL左右，对应6孔板1孔；②即用型基质胶对温度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接触碰基质胶液面所及的瓶身，影响基质胶质量。

2.2  先将2~3mL的干细胞培养基加入15mL离心管中备用。

2.3  解冻：将从液氮中取出的冻存管快速浸入37℃温水中，快速摇动，使其在1~2min内快速解冻；

注意：细胞从液氮中拿出的速度要快，尽量减少其暴露在室温中的时间。

2.4  离心：冻存管中的冻存液解冻后，将其逐滴加入含有干细胞培养基的15mL离心管中，将15mL离心管置于低速离心机中配比平衡后，1000rpm离心3min；

2.5  重悬：离心后弃上清加1mL人多能干细胞培养基对干细胞沉淀进行吹吸混匀，吹吸3~5次左右。

2.6  接种：吹吸均匀后，将已经平衡好的即用型基质胶弃掉，将吹打均匀的干细胞悬液加入到已经包被好的6孔板中，并补全每孔2mL培养体系。

2.7  培养：接种后的6孔板可以置于倒置相差显微镜下观察接种的干细胞密度以及细胞团块大小，呈4个细胞以上的团块较合格，水平十字轻轻晃动6孔板/12孔板使细胞均匀分布。并置于37℃，5% CO₂的恒温培养箱培养，第2天观察细胞贴壁情况；

质量控制