蛋白酶K

活力：40mAnsom u/mg

性状：粉末，是一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶，来源于白色念球菌（. Tritirachium album. ），具有很高的比活性。EDTA等鳌合剂或SDS等去垢剂不能使蛋白酶K失活，反而增强和稳定酶活性，并在较广的PH范围内（PH4-12.5）均有活性。在组织或细胞核酸分离时，使核酸酶（RNA和DNA）以及反应中其他酶失活。

用途：生化研究。广谱蛋白酶，95C加热10分钟，则完全失活。可替代DEPC处理RNA抽提用的离心管和 头，实现灭活RNase A的目的，也用于处理RNase-Free的水。充分降解组织或细胞中蛋白质分子特别是核酸，以达到释放和萃取高质量核酸的辅助试剂。用于质粒或基因组DNA、RNA的分离以及蛋白多肽印迹实验。

蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。

蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。

推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。

蛋白酶K配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准（proteinase K）：将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

蛋白酶k的作用

值得注意的是，蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理,它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用,以增加探针与靶核酸结合的机会,提高杂交信号.但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时,都会对细胞的结构有一定的破坏,导致组织切片的脱落,细胞核的消失,从而影响杂交结果.EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用,解决上述出现的问题,并能达到理想的染色效果.

孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。