RKI-1447 (ROCK抑制剂)

化学名

1-[(3-hydroxyphenyl)methyl]-3-(4-pyridin-4-yl-1,3-thiazol-2-yl)urea

简称

RKI-1447

别名

RKI1447, RKI 1447

中文名

N/A

化学式

C₁₆H₁₄N₄O₂S

分子量

326.37

CAS号

1342278-01-6

纯度

98%

溶剂/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO65mg/ml; Ethanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.53ml DMSO，或者每3.26mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC6664-10mM用DMSO配制。

产品描述

RKI-1447是一种有效的ROCK1和ROCK2抑制剂，IC50分别为14.5nM和6.2nM，有抗侵入和抗肿瘤活性。

信号通路

Cell Cycle; TGF-beta/Smad; Stem Cells & Wnt

靶点

ROCK2

ROCK1

－

－

－

IC50

6.2nM

14.5nM

－

－

－

体外研究

RKI-1447是一种细胞渗透性pyridylthiazolyl-尿素，作为一种有效的，ATP位点靶向Rho激酶抑制剂，并显示针对PKA、PKN1/PRK1、p70S6K/RPS6kB1、AKT1、MRCKa/CDC42BPA的多效价降低(在1μM时抑制率分别为85.5%、80.5%、61.9%、56.0%和50.4%)或其它15种激酶。该RKI-1447/ROCK1复合物的晶体结构表明RKI-1447是I型激酶抑制剂，通过与铰链区和DFG基序和ATP结合位点结合。在人类癌细胞中，RKI-1447抑制ROCK底物MLC-2和MYPT-1的磷酸化，而在浓度高达10μM时对AKT，MEK和S6激酶的磷酸化水平没有影响。RKI-1447也抑制LPA刺激下ROCK-介导的细胞骨架重组(肌动蛋白应力纤维形成)，但不影响PDGF和血管舒缓激肽刺激下PAK-介导的伪足和丝状伪足形成。RKI-1447抑制乳腺癌细胞的迁移，侵袭和锚定非依赖性肿瘤的生长。

体内研究

在转基因小鼠模型中，RKI-1447有效抑制乳腺肿瘤的生长。小鼠肿瘤用RKI-1447处理时，肿瘤体积增加的平均百分比仅为8.8%。因此，RKI-1447抑制乳腺肿瘤的生长87%，并且和对照小鼠相比，乳腺肿瘤小7.7倍。RKI-1447治疗不会导致小鼠体重减轻。

临床实验

N/A

特征

N/A

酶活性检测实验

方法

激酶的抑制是使用Invitrogen公司的Z-莱特® FRET激酶试验测定的，丝氨酸/苏氨酸13肽底物是基于肌球蛋白轻链序列KKRPQRRYSNVF的。化合物进行8点稀释并做复孔，并进行三次独立实验以确定平均IC50值。测定条件进行了优化，15微升激酶反应体系中含5纳克酶在50mM HEPES(pH 7.5)，10毫摩尔氯化镁，1mM EGTA和0.01% Brij-35。将反应物温育在室温下1小时，1.5μM多肽底物和12.5μM的ATP(为ROCK1)或2μM底物和50μM的ATP(为ROCK2)。然后将反应停止，并且磷酸化多肽对非磷酸化多肽的比例由非磷酸化肽的选择性裂解来确定。随后香豆素在400nM发射导致在445nM激发，且能量转移到荧光素并最后发射在520nM。该底物包含香豆素和荧光素，只有未切割磷酸化底物将发生FRET。445nM和520nM处的信号比是使用Wallac的EnVision读板仪(型号为2102平板读数器)测量的。

细胞实验

细胞系

MDA-MB-231

浓度

~600μM

处理时间

72小时

方法

细胞接种在96孔组织培养板(每孔1200个细胞)，并孵育24小时。孵育后，细胞用空白或不同浓度梯度的RKI-1447处理72小时。温育后，新制备的MTT(2mg/ml)加入到每孔中，并温育3小时。孵育后在540nM处读板。

动物实验

动物模型

MMTVneu转基因小鼠[FVB/N-Tg (MMTVneu) 202 Mul/J]

配制

20% 2-羟丙基-β-环糊精(HPCD)

剂量

200毫克/千克/天

给药方式

腹腔注射

产品编号

产品名称

包装

SC6664-10mM

RKI-1447 (ROCK抑制剂)

10mM×0.2ml

SC6664-5mg

RKI-1447 (ROCK抑制剂)

5mg

SC6664-25mg

RKI-1447 (ROCK抑制剂)

25mg

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说明书

1份