RO-3306 (CDK抑制剂)

化学名

(5Z)-5-(quinolin-6-ylmethylidene)-2-(thiophen-2-ylmethylamino)-1,3-thiazol-4-one

简称

RO-3306

别名

RO 3306, RO3306, Cdk1 Inhibitor IV, RO-3306

中文名

N/A

化学式

C₁₈H₁₃N₃OS₂

分子量

351.45

CAS号

872573-93-8

纯度

98%

溶剂/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO13mg/ml warming; Ethanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.42ml DMSO，或者每3.51mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC6673-10mM用DMSO配制。

产品描述

RO-3306是一种ATP竞争性的选择性CDK1抑制剂，Ki为20nM，选择性是其他各种人类激酶的15倍多。

信号通路

Cell Cycle

靶点

CDK1

PKCδ

SGK

ERK

PKA

IC50

20nM(Ki)

318nM(Ki)

497nM(Ki)

1980nM(Ki)

>2000nM(Ki)

体外研究

RO-3306抑制CDK1/cyclin B1、CDK1/cyclin A、CDK2/cyclin E和CDK4/cyclin D活性，Ki分别为35nM、110nM、340nM和>2000nM。HCT116、SW480和HeLa细胞用RO-3306处理20小时导致细胞周期完全阻滞在G2/M期。HCT116和SW480的增殖被RO-3306有效阻断。RO-3306似乎在癌细胞(HCT116和SW480)中比在非致瘤性细胞(MCF 10A和MCF 12A)中具有更强的促凋亡作用。10μM浓度的RO-3306有效阻止卵母细胞成熟。

体内研究

N/A

临床实验

N/A

特征

N/A

酶活性检测实验

方法

CDK1 cyclin B1，CDK1 cyclin A，CDK2 cyclin E和CDK4 cyclin D通过均相时间分辨荧光法在96孔格式中测量。实验缓冲液包含25mM Hepes，6.25mM MgCl₂，0.003% Tween 20，0.3mg/ml BSA，1.5mM DTT和如下含量的ATP：162μM(CDK1)，90mM(CDK2)，或135μM(CDK4)。CDK1和CDK2缓冲液包含10mM MgCl₂。测试化合物在20μl实验缓冲液中稀释为它们终浓度的3倍，反应通过加入40μl包含pRB底物(0.185μM)的试验缓冲液起始。板在37℃下连续搅拌培养30分钟，反应通过加入15μl含1.6μM抗磷酸pRB抗体(Ser-780)的25mM Hepes，24mM EDTA和0.2mg/ml BSA终止。再振荡培育30分钟后，加入15μl包含3nM Lance-Eu-W1024-labeledanti-rabbitIgG和60nM Alophycocyanin共轭的抗-His-6 抗体的25mM Hepes，以及0.5mg/ml BSA，培育1小时。板在Victor-V多标阅读器上以340nM激发波长和615nM与665nM发射波长读取数据。IC50值根据665nM下的读数值进行计算，并归一化为615nM下铕的读数值。Ki值根据公式Ki=IC50/(1+S/Km)计算，其中S是试验中ATP浓度，Km是相对ATP的Michaelis-Menten常数。对激酶组的抑制活性通过IMAP测定技术确定。

细胞实验

细胞系

MDA-MB-231细胞系

浓度

20μM

处理时间

72h

方法

对数生长期细胞(25,000)接种于96孔板，在37℃培养箱中与CO₂一起培养，24小时后，给予不同浓度RO-3306以测定达到50%生长抑制(IC50)的药物浓度。MTT(20μl，包含5mg/ml储备溶液的生理盐水)加入每孔中，细胞培养4小时。移除上清液，来自活细胞的甲瓒晶体溶解在200μl无水DMSO中。吸光度使用550模式酶标仪在565nM波长下检测。

动物实验

动物模型

N/A

配制

N/A

剂量

N/A

给药方式

N/A

产品编号

产品名称

包装

SC6673-10mM

RO-3306 (CDK抑制剂)

10mM×0.2ml

SC6673-5mg

RO-3306 (CDK抑制剂)

5mg

SC6673-25mg

RO-3306 (CDK抑制剂)

25mg

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说明书

1份