Sorafenib (Raf抑制剂)

化学名

4-[4-[[4-chloro-3-(trifluoromethyl)phenyl]carbamoylamino]phenoxy]-N-methylpyridine-2-carboxamide

简称

Sorafenib

别名

BAY 43-9006, BAY 545-9085, BAY-545-9085, Nexavar, sorafenib N-oxide, sorafenib tosylate, 索拉非尼

中文名

索拉菲尼

化学式

C₂₁H₁₆ClF₃N₄O₃

分子量

464.82

CAS号

284461-73-0

纯度

99.5%

溶剂/溶解度

Water <1mg/ml; DMSO 63mg/ml warmed; Ethanol <1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.08ml DMSO，或者每4.65mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC0236-10mM用DMSO配制。

产品描述

Sorafenib是Raf-1、B-Raf和VEGFR-2的多重激酶抑制剂，无细胞试验中IC50分别为6nM、22nM和90nM。

信号通路

MAPK

靶点

Raf-1

mVEGFR2(Flk1)

mVEGFR3

B-Raf

B-Raf(V599E)

IC50

6nM

15nM

20nM

22nM

38nM

体外研究

Sorafenib抑制野生型和V599E突变型B-Raf活性，IC50分别为22nM和38nM。Sorafenib也能有效抑制mVEGFR2(Flk-1)、mVEGFR3、mPDGFRβ、Flt3和c-Kit，IC50分别为15nM、20nM、57nM、58nM和68nM。Sorafenib能够较弱地抑制FGFR-1，IC50为580nM。Sorafenib对ERK-1、MEK-1、EGFR、HER-2、IGFR-1、c-Met、PKB、PKA、cdk1/cyclinB、PKCα、PKCγ和pim-1没有活性。Sorafenib显著抑制NIH 3T3细胞中VEGFR2磷酸化，IC50为30nM，也会抑制HEK-293细胞中Flt-3磷酸化，IC50为20nM。Sorafenib有效阻断大多数细胞中MEK 1/2和ERK 1/2磷酸化，但不阻断A549或H460细胞中该过程，同时不影响PKB通路的抑制。Sorafenib抑制HAoSMC和MDA-MB-231细胞的增殖，IC50分别为0.28μM和2.6μM。除了抑制RAF/MEK/ERK信号通路，Sorafenib tosylate显著抑制eIF4E的磷酸化作用，并以MEK/ERK依赖的方式下调肝癌(HCC)细胞中Mcl-1水平。Sorafenib抑制PLC/PRF/5和HepG2细胞的增殖，IC50分别为6.3μM和4.5μM，并诱导显著的细胞凋亡。

体内研究

Sorafenib(~60mg/kg)口服给药，对各种人肿瘤异种移植模型，包括MDA-MB-231、Colo-205、HT-29、DLD-1、NCI-H460和A549表现出广谱的、剂量依赖性抗肿瘤活性，而没有毒性。与抗肿瘤功效相联系，Sorafenib治疗有效抑制HT-29和MDA-MB-231异种移植物中MEK 1/2磷酸化和pERK 1/2水平，但对Colo-205异种移植物没有作用，并且也能显著抑制MDA MB-231、HT-29和Colo-205肿瘤异种移植物中肿瘤微血管面积(MVA)和微血管密度(MVD)。在SCID小鼠体内，Sorafenib治疗对PLC/PRF/5肿瘤异种移植产生剂量依赖性生长抑制，10mg/kg和30mg/kg剂量下，TGIs分别为49%和78%，与ERK和eIF4E磷酸化抑制，微血管面积减少，和肿瘤细胞凋亡的诱导相一致。Sorafenib通过下调NF-κB介导的Mcl-1和cIAP2表达的作用机制使bax-/-细胞对TRAIL剂量依赖性敏感。Sorafenib(30-60mg/kg)与TRAIL(5mg/kg)结合对TRAIL抗性HCT116 bax-/-和HT29肿瘤异种移植物表现出显著的功效。

临床实验

N/A

特征

N/A

酶活性检测实验

方法

重组杆状病毒表达的Raf-1(残基305-648)和B-Raf(残基409-765)以融合蛋白纯化。全长人MEK-1由PCR产生，并以大肠杆菌裂解物中的融合蛋白纯化。将Sorafenib加入到含Raf-1(80ng)或B-Raf(80ng)以及MEK-1(1μg)混合物的实验缓冲液[20mM Tris(pH8.2)、100mM NaCl、5mM MgCl2和0.15% β-巯基乙醇]中，DMSO终浓度为1%。加入25μl 10μM γ[33P]ATP(400Ci/mol)启动Raf激酶试验(终体积50μl)，并在32℃下培育25分钟。磷酸化的MEK-1通过过滤到磷酸纤维素板上采集，使用1%磷酸洗掉未结合的放射性。微波炉加热干燥后，使用β型板计数器量化过滤器结合放射性。人VEGFR2(KDR)激酶域被表达，并从Sf9裂解物中纯化。VEGFR2的时间分辨荧光分析法能量转移测试在96孔不透明板中以时间分辨荧光分析法能量转移格式进行。最终反应条件如下：1到10μM ATP、25nM poly GT生物素、2nM铕标记的磷酸(p)-酪氨酸抗体(PY20)、10nM APC、1% DMSO终浓度的1到7nM细胞质激酶域、50mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、0.1mM EDTA、0.015% Brij-35、0.1mg/ml BSA和0.1% β-巯基乙醇。反应体积为100μl，加入酶启动反应。反应启动1.5到2.0小时后，板以615和665nm在Perkin-Elmer VictorV多标记分析仪上读数。信号按如下比率计算：对每孔(665nm/615nm)×10,000。对IC50的产生，在酶起始反应之前加入Sorafenib。50倍的库存板由Sorafenib在50% DMSO/50%蒸馏水溶液中连续稀释制得。最终Sorafenib在1% DMSO中的浓度范围为10μM到4.56nM。

细胞实验

细胞系

MDA-MB-231和HAoSMC

浓度

溶解于DMSO，终浓度为~10μM

处理时间

72小时

方法

细胞在逐渐增加浓度的Sorafenib下暴露72小时。细胞数通过Cell TiterGlo ATP发光测定试剂盒进行定量。该试验通过测定基于细胞中ATP量的发光信号，测量每孔中的活细胞。

动物实验

动物模型

雌性NCr-nu/nu小鼠，皮下植入MDA-MB-231、Colo-205、HT-29、H460或A549细胞

配制

以4倍(4×储备溶液，稀释为1×)溶解于聚氧乙烯蓖麻油/乙醇(50:50)

剂量

~60mg/kg

给药方式

口服，每天一次

产品编号

产品名称

包装

SC0236-10mM

Sorafenib (Raf抑制剂)

10mM×0.2ml

SC0236-5mg

Sorafenib (Raf抑制剂)

5mg

SC0236-25mg

Sorafenib (Raf抑制剂)

25mg

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说明书

1份