植物组织直接PCR试剂盒

产品描述
 

植物组织直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。试剂盒采用独特的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mg植物叶片即可进行实验。

本试剂盒中提供的2× Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。

产品组分
 

a）6× DNA Loading buffer：不含SDS。

b）2× Plant Master Mix：包含热启动Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。

运输方法
 

冰袋运输。

保存方法
 

1. 试剂10183-A【Buffer P1】，在常温干燥条件下，可保存12个月，如需保存更长时间可置于4℃。低温保存，易出现沉淀，可平衡至室温或37℃水浴10 min，待沉淀溶解后，混匀使用。

2. 试剂10183-B【Buffer P2】，中和裂解产物，使其不影响后续 PCR 反应。保存条件与Buffer P1一样。
3. 试剂10183-C【6× DNA Loading Buffer】，可置于4℃或-20℃长期保存。

4. 试剂10183-D【2× Plant Master Mix】，-20℃保存，避免反复冻融。如果环境温度过高，2× Plant Master Mix 可能会变浑浊，可置于冰上放置1-2 min，待溶液澄清，上下颠倒混匀3-5次后再使用。

操作方法
 

本试剂盒根据不同实验需求提供了两种操作方法。直接法仅需要将一小片植物组织加入PCR反应体系即可；裂解法则是将少量含有植物组织的裂解产物加入PCR反应体系。其中，裂解法适合目的片段较长，扩增难度较大，以及需要对同一样本进行多次PCR扩增的实验。

裂解法

1. 取3-5 mg叶片（直径5-7 mm）组织，置于200 μL或1.5 mL离心管中。

注：切勿加入过量叶片组织，以便酶解反应更顺利进行。

2. 在离心管中加入50 μL Buffer P1，确保裂解液能够完全浸没叶片组织。

3. 盖好离心管盖，95℃处理10 min。

注：加热后，若管壁上液体较多，可进行短暂瞬时离心。

4. 加入50 μL Buffer P2，用微量移液器吹打或者涡旋混匀。

5. 所得裂解液可4℃保存（5天）或-20℃长期保存或直接用于PCR扩增。

直接法

1. 在200 μL离心管中加入相应的2× Plant Master Mix，再添加对应的引物，并用ddH₂O使其稀释1×（PCR体系配置见下表）

2. 剪取1-2 mg叶片碎块（直径2-3 mm）加入配置好的1×PCR反应体系。

注：确保叶片碎块完全被PCR反应液浸没，切勿加入过量组织叶片。

3. 根据优化好的PCR条件（退火温度等）进行PCR反应。

4. 琼脂糖凝胶电泳检测结果。

注：建议使用试剂盒提供的6× DNA Loading Buffer，切勿使用含有SDS的Loading Buffer进行电泳。