全血直接PCR试剂盒

产品描述

       全血直接PCR试剂盒（Animal Blood Direct PCR Kit）可以直接对全血样本进行PCR，无需DNA提取或样品处理，大大降低了污染风险，缩短了检测时间。
 

试剂盒中包含配方优化的2× Blood Master Mix，具有很强抑制物耐受性，人血的模板加入量可达45%，鼠血的可达20%，可以灵敏的扩增血液样本中基因组和外源目的DNA片段。2× Blood Master Mix包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，扩增产物末端加A，适用于Hieff Clone™快速克隆试剂盒（货号：10907ES60/10908ES60）。

该试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂（EDTA、柠檬酸盐、肝素等）。适用样本来源包括人血、鼠血、鸡血、鸟血、牛血、狗血等。

产品组分
 

a）2× Blood Master Mix：包含Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、MgCl₂、PCR反应增强剂、优化剂以及稳定剂等。

b）6× DNA Loading buffer：不含SDS。

运输和保存方法
 

冰袋运输。-20℃保存。避免反复冻融。

操作方法
 

1. PCR反应体系配制

注：使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。

a）模板使用量：进行基因组上的目的片段检测，建议使用少量的血液量作为模板；检测血液样本中某种病毒或细菌等的目的片段，建议扩大PCR体系并使用较大量的血液模板。血液模板最多占PCR体系的45%（人血）、20%（鼠血）。若模板使用含有血液的采集卡，可截取直径1-4 mm的血点，直接加入20-50 μL PCR反应体系进行扩增。

b）引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1-0.5 μM之间进行调整。

c）反应体系：推荐使用20 μL或 50 μL，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。

d）体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

2. PCR反应条件设置

a）预变性：95℃，5 min可以让白细胞裂解，释放可用于PCR扩增的基因组DNA。请勿缩短时间或降低温度。

b）退火温度：退火温度设置为引物Tm值即可。然而，使用高的退火温度可以有效减少非特异性扩增，并提高全血模板的扩增效率。因此，如扩增产物特异性较差，可以建立一个温度梯度反应去寻找引物模板最适退火温度。

c）延伸时间：按30 sec/kb设定，如不足30 sec，设置30 sec即可。

d）扩增循环数：35个循环已可以扩增足量产物。太多的循环将会导致非特异性扩增增加。