Temsirolimus (mTOR抑制剂)

化学名

Rapamycin, 42-[3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-2-methylpropanoate]

简称

Temsirolimus

别名

CCI 779, CCI-779, Torisel

中文名

N/A

化学式

C₅₆H₈₇NO₁₆

分子量

1030.29

CAS号

162635-04-3

纯度

98%

溶剂/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO75mg/ml; Ethanol75mg/ml

溶液配制

5mg加入0.49ml DMSO，或者每10.3mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF2672-10mM用DMSO配制。

产品描述

Temsirolimus (CCI-779, NSC 683864)是一种特定的mTOR抑制剂，在无细胞试验中IC50为1.76μM。

信号通路

PI3K/Akt/mTOR

靶点

mTOR

－

－

－

－

IC50

1.76μM

－

－

－

－

体外研究

Temsirolimus抑制核糖体蛋白S6磷酸化，作用于PTEN阳性DU145细胞比作用于PTEN阴性PC-3细胞更有效，且抑制细胞生长和细胞的克隆生存，这种作用存在浓度依赖性。Temsirolimus按100ng/ml剂量处理原代人淋巴细胞性白血病(ALL)细胞，显著抑制增殖，且诱导凋亡。在FKBP12存在时，Temsirolimus有效抑制mTOR激酶活性，IC50为1.76μM，与Rapamycin(IC50为1.74μM)类似。Temsirolimus按纳摩尔浓度(10nM到<5μM)处理，通过FKBP12依赖机制，具有适度的选择性抗增殖活性，在低微摩尔浓度(5-15μM)时，可以完全抑制多种肿瘤细胞增殖，涉及FKBP12非依赖性的mTOR信号阻断。Temsirolimus按微摩尔而不是纳摩尔浓度(20μM)处理，显著降低全部蛋白质合成，也显著降低多聚核糖体的分解，伴随着翻译延伸因子eEF2和翻译起始因子eIF2A的磷酸化快速提高。

体内研究

Temsirolimus按20mg/kg剂量腹腔注射，每周5天，显著延迟DAOY移植瘤生长，与对照组相比，处理一周，延迟160%，处理两周，延迟240%。Temsirolimus按100mg/kg高剂量单独给药腹腔注射，一周内，诱导肿瘤体积衰退37%。Temsirolimus处理2两周，也延迟抗Rapamycin的U251移植瘤生长，延迟148%。Temsirolimus作用于患Huntington疾病的小鼠模型，抑制mTOR，提高四种不同行为任务的表现，且降低聚合形成。Temsirolimus处理8226、OPM-2和U266移植瘤的皮下生长，诱导显著的抗癌反应，这种作用存在剂量依赖性，作用于8226和OPM-2移植瘤，ED50分别为20mg/kg和2mg/kg，与抑制增殖和血管生长，诱导凋亡和肿瘤细胞尺寸降低相关。每天按10mg/kg剂量处理携带人ALL的NOD/SCID移植瘤模型，降低外周血膨胀和脾肿大。

临床实验

N/A

特征

N/A

酶活性检测实验

方法

Flag标记的野生型人mTOR(Flag-mTOR) DNA结构短暂转染进HEK293细胞。48小时后，进行蛋白提取和Flag-mTOR纯化。在体外，在不同浓度Temsirolimus存在而没 FKBP12时，在96孔板上进行纯化的Flag-mTOR激酶实验，通过解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)，使用His6-S6K1作为底物来测量。在激酶实验 buffer(10mM Hepes pH 7.4，50mM NaCl，50mM β-甘油磷酸，10mM MnCl₂，0.5mM DTT，0.25μM微囊藻素LR和100μg/ml BSA)上次对酶进行稀释。每孔中，12μl稀释的酶与0.5μl Temsirolimus混合。加入含ATP和His6-S6K的12.5μl激酶buffer开始激酶反应，终体积为25μl，含800ng/ml FLAG-mTOR，100μM ATP和1.25μM His6-S6K。反应板在室温下温和震荡温育2小时，加入25μl终止液(20mM Hepes pH 7.4，20mM EDTA和20mM EGTA)终止反应。磷酸化的(Thr-389)His6-S6K的DELFIA检测在室温下使用单克隆抗P(T389)-p70S6K抗体进行，抗体使用铕-N1-ITC(Eu)(每种抗体10.4Eu)标记。45μl终止的激酶反应混合物转移到含55μl PBS的MaxiSorp板上。His6-S6K 粘附2小时后，吸除每孔，使用PBS冲洗。加入含40ng/ml Eu-P(T389)-S6K抗体的100μl DELFIA buffer。轻轻搅拌，再使抗体结合持续进行1小时。吸除每孔，然后使用含0.05% Tween-20(PBST)的PBS冲洗4次。每孔加入100μl DELFIA增强溶液，然后在PerkinElmer Victor模板酶标仪上读数。

细胞实验

细胞系

A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, PC3-MM2

浓度

溶于DMSO，终浓度为~20μM

处理时间

72小时

方法

使用不同浓度Temsirolimus处理细胞72小时。处理后，通过MTS染料转换，使用CellTiter AQ检测试剂盒测定存活细胞密度。

动物实验

动物模型

皮下注射DAOY或U251细胞的雌性无胸腺裸鼠

配制

在100% EtOH作为50mg/ml储存液中制备，然后在5% Tween-80和5% PEG 400中稀释

剂量

20mg/kg

给药方式

每天注射，每周5次

产品编号

产品名称

包装

SF2672-10mM

Temsirolimus (mTOR抑制剂)

10mM×0.2ml

SF2672-5mg

Temsirolimus (mTOR抑制剂)

5mg

SF2672-25mg

Temsirolimus (mTOR抑制剂)

25mg

—

说明书

1份