TEV Protease

      TEV Protease是一种在大抽杆菌中重组表达的带His标签(6X His tag)的烟草蚀纹病毒(Tobacco Etch Virus, TEV)的半胱氨酸蛋白酶，能特异性地识别七肽序列Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly/Ser，并在Gln和Gly/Ser氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。
      建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N端，并在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入TEV Protease专一性识别与酶切的上述七肽序列。这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，从而限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。构建含有TEV Protease专一性识别位点的目的蛋白表达质粒，可以考虑选购碧云天的质粒pET-N-His-TEV (P2905)。
      TEV Protease的的酶切温度是30℃，但在4-30℃和pH6.0-8.5范围内皆有活性。因此在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，建议在4℃酶切过夜。
      TEV Protease还有一个突出的优点是在400mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用鎳柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV Protease加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中，在4℃边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV Protease进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白，溶液中带有His标签的本TEV Protease以及切除下来的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。His标签蛋白的纯化可以考虑选购碧云天的BeyoGold™ His-tag Purification Resin 
(P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)。
      酶活性单位定义：30℃，pH8.0条件下反应1小时，能够切割3µg对照底物达85%以上所需的酶量为一个活性单位。
      碧云天TEV Protease酶活性鉴定结果可参考图1。

      
         图1.TEV Protease切割GST标签蛋白的效果图。含有TEV Protease识别位点的76kD GST标签蛋白与TEV Protease进行反应，
         底物的用量为3μg，酶的用量依次为0、0.1、0.25、0.5、0.67、1、2U，30°C在1X TEV Buffer中反应1小时后取样进行
         SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色。酶切产物大小为约50kD的目的蛋白和约26kD的GST标签。

      TEV Protease分子量大小约28kDa，纯度：≥95%。
      TEV Protease储存液组成为：25mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 5mM DTT, 50%(v/v)甘油, pH8.0。
      10X TEV Buffer组成为：500mM Tris-HCl, 500mM NaCl, 5mM EDTA, 10mM DTT, pH8.0。
      本产品一个包装含有1000单位的酶，可用于约3mg带有TEV Protease识别位点的融合蛋白的切割。
包装清单：

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项：
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。