Tivantinib (c-Met抑制剂)

化学名

(3R,4R)-3-(5,6-dihydro-4H-pyrrolo[3,2,1-ij]quinolin-1-yl)-4-(1H-indol-3-yl)pyrrolidine-2,5-dione

简称

Tivantinib

别名

ARQ197, ARQ-197, ARQ 197, UNII-PJ4H73IL17

中文名

N/A

化学式

C₂₃H₁₉N₃O₂

分子量

369.42

CAS号

905854-02-6

纯度

98%

溶剂/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO73mg/mlEthanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.35ml DMSO，或者每3.69mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF5355-10mM用DMSO配制。

产品描述

Tivantinib (ARQ 197)是个非ATP竞争性的c-Met抑制剂，在无细胞试验中Ki为0.355μM，对Ron几乎没有作用活性，对EGFR、InsR、PDGFRα和FGFR1/4没有抑制作用。Phase 3。

信号通路

Protein Tyrosine Kinase

靶点

c-Met

－

－

－

－

IC50

0.355μM(Ki)

－

－

－

－

体外研究

ARQ-197抑制HGF/c-met诱导的细胞反应。ARQ-197具有抗肿瘤活性，抑制A549，DBTRG和NCI-H441细胞增殖，IC50分别为0.38、0.45、0.29μM。用ARQ-197处理，导致MAPK信号级联放大磷酸化降低，且阻断入侵和迁移。此外，没有内源性c-Met表达的NCI-H661细胞中c-Met异常表达，形成一种入侵表现型，也被ARQ-197抑制。加入浓度不断增加的ARQ-197不会明显影响ATP的Km值，但是用0.5μM ARQ-197处理c-Met，则降低c-Met的Vmax值，降低3倍。ARQ-197降低Vmax而不影响ATP的Km值说明ARQ-197抑制c-Met是非ATP竞争抑制，也说明ARQ-197具有高度激酶选择性。ARQ-197抑制人类重组c-Met，具有恒定的Ki值，为355nM。虽然使用过的ATP最高浓度为200μM，但是当ATP浓度为1mM时，ARQ-197抑制c-Met效果不会降低。ARQ-197抑制c-Met磷酸化，且阻断下游c-Met信号通路。ARQ-197阻断组成型和配体调节的c-Met自磷酸化，通过增强c-Met活性，反过来抑制下游c-Met效应器。ARQ-197作用于表达c-Met的人类癌细胞包括HT29、MKN-45和MDA-MB-231细胞，诱导caspase依赖的凋亡。

体内研究

ARQ-197处理 HT29、MKN-45和MDA-MB-231三种移植瘤模型，肿瘤生长率分别降低66%,45%和79%。ARQ-197按200mg/kg剂量口服给药这三种移植瘤模型，显示体重都没有明显改变。药效学方面，ARQ-197作用于人类结肠移植瘤HT29，强抑制c-Met的磷酸化，ARQ-197按200mg/kg剂量单独口服给药24小时后，c-Met自磷酸化强烈下降。总之，ARQ-197抑制人类c-Met依赖的移植瘤生长。

临床实验

N/A

特征

ARQ-197是个应用到晚期人类临床试验的c-Met选择性抑制剂。

酶活性检测实验

方法

100ng重组c-Met蛋白和浓度不断增高ARQ-197在室温下预温育30分钟。随后，100μM聚Glu-Tyr底物和含5μCi [γ-32P]ATP的不同浓度ATP加到反应混合物中。反应在室温下进行5分钟，然后加入5μl SDS-聚丙烯酰胺胶,降低样本缓冲液。上样到7.5%丙烯酰胺胶上，进行SDS-PAGE。通过放射自显影观察到磷酸化的聚Glu-Tyr底物。通过光密度法测定c-Met活性。

细胞实验

细胞系

T29，MKN-45和MDA-MB-231细胞

浓度

0.03-10μM

处理时间

24、32和48细胞

方法

HT29，MKN-45和MDA-MB-231细胞按每孔5×10³个接种在96孔板上，孔中有含10% FBS的培养基，在黑暗中过夜处理。第二天，用浓度不断增长的ARQ-197(0.03-10μM)在37℃下处理细胞24、32和48小时。ARQ-197处理后，移除培养基，细胞在含2μg/ml Hoescht 33342的标签溶液(10mM HEPES，140mM NaCl和6mM CaCl₂)中温育至少10分钟，用Annexin V-FITC(稀释500倍)和1μg/ml碘化丙锭染色。进行高含量的图像采集和分析，每孔获取四个图像。4,6-二脒基-2-苯基吲哚，FITC和罗丹明通道分别在16.7ms/10%，500ms/35%和300ms/30%进行处理。处理图像，测定每组通道和每种情况下的阳性细胞数。此外，在有或者没有25、50和100μM ZvAD-FMK存在条件下，HT29细胞用浓度不断增加的ARQ-197处理32小时。所有实验重复进行三次。测定抑制c-Met是否导致细胞凋亡，当使用siRNA分解磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和c-Met时ARQ-197的作用效果。HT29，MKN-45和MDA-MB-231细胞转染无靶点对照siRNA，GAPDH靶点对照siRNA，或met靶点siRNA。3天后，使用特点抗体测定c-Met，GAPDH和β-actin表达水平。为了测定caspase依赖是否影响，HT29，MKN-45和MDA-MB-231细胞转染met靶点siRNA，进行2天。然后在有或没有浓度不断增高的ZvAD-FMK存在下再温育1天。无靶点siRNA和GAPDH siRNA也转染，作为对照。然后用Annexin V-FITC和碘化丙锭进行细胞染色，测定凋亡细胞百分数。

动物实验

动物模型

携带HT29、MKN-45或MDA-MB-231移植瘤的无胸腺裸鼠

配制

溶于PEG 400/20%维生素E，聚乙二醇琥珀(60:40)30mg/ml

剂量

200mg/kg

给药方式

口服处理

产品编号

产品名称

包装

SF5355-10mM

Tivantinib (c-Met抑制剂)

10mM×0.2ml

SF5355-5mg

Tivantinib (c-Met抑制剂)

5mg

SF5355-25mg

Tivantinib (c-Met抑制剂)

25mg

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说明书

1份