产品描述

Hieff NGS^® MaxUp Dual-model mRNA Library Prep Kit for Illumina^®是针对Illumina^®高通量测序平台专门研发的用于mRNA转录组文库构建试剂盒，本试剂盒cDNA二链合成模块配有两种buffer，客户可根据需要进行常规建库或链特异性建库。本产品适用于起始模板为10 ng-1μg不同来源真核生物总RNA样本。经过mRNA分离、片段化、链双链cDNA合成、末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增，总RNA样品最终转化为适用于Illumina^®平台测序的文库。

试剂盒包含三个独立模块，BOX-I的核心为纯化mRNA所需的poly（A）磁珠。BOX-II包含mRNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性dscDNA合成所需的所有试剂。其中链特异性二链合成buffer中将dTTP替换为dUTP，使cDNA第二链中掺入dUTP，而本试剂盒使用的高保真DNA聚合酶无法扩增含尿嘧啶的DNA模板，实现链特异性。BOX-III实际上是一个高效的微量DNA文库构建试剂盒，来自我公司的Hieff NGS^® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina^®。提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

保存方法

       冰袋运输。效期一年。存储温度如下，切不可搞错！

       Box I：2-8℃保存；Box II：-20℃保存；Box III：-20℃保存。
 

注意事项

一、 关于操作

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.请于使用前将试剂盒各组分置于室温解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀，短暂离心后置于冰上待用。

3.推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应，使用前应预热PCR仪至反应温度附近。
4.请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理，推荐使用ThermoFisher公司的RNAZap^TM高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。
5.PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染，进而影响实验结果准确性。推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离；配备文库构建专用移液器等设备；定时对各实验区域进行清洁（推荐使用ThermoFisher公司的DNAZap^TM高效核酸去除喷雾），以保证实验环境的洁净度。

二、应用范围

      本试剂盒适用于起始模板量为10-1000 ng（体积≤50 μL）的高质量动物、植物和真菌等真核生物的总RNA。如初始RNA浓度偏低，体积超过50 μL，可使用Hieff NGS^® RNA Cleaner磁珠进行浓缩。RNA需通过Agilent 2100 Bioanalyzer RNA 6000 Nano/Pico芯片检测，RIN值要求＞7，以保证mRNA有完整的poly(A)尾结构。

      本试剂盒的mRNA分离模块使用的是oligo d(T)磁珠，只有带poly(A)尾的mRNA才能被提取；其他不具poly(A)尾的mRNA，如非编码RNA、无poly(A)尾的mRNA等不能适用本试剂盒。此外，FFPE样本中的mRNA降解严重，通常无完整的poly(A)尾结构，故亦无法使用本试剂盒进行建库。

      本试剂盒所制备文库可进行多种RNA-Seq应用，包括：

基因表达（gene expression）

单核苷酸变异检测（single nucleotide variation discovery）

基因融合鉴定（gene fusion identification）

剪切变异体分析（splice variant analysis）