Torin 1 (mTOR抑制剂)

化学名

1-[4-(4-propanoylpiperazin-1-yl)-3-(trifluoromethyl)phenyl]-9-quinolin-3-ylbenzo[h][1,6]naphthyridin-2-one

简称

Torin 1

别名

Torin 1 cpd, Torin1, Torin-1

中文名

N/A

化学式

C₃₅H₂₈F₃N₅O₂

分子量

607.62

CAS号

1222998-36-8

纯度

99.0%

溶剂/溶解度

Water <1mg/ml; DMSO 20mg/ml warmed; Ethanol <1mg/ml

溶液配制

5mg加入0.82ml DMSO，或者每6.08mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SC0245-10mM用DMSO配制。

产品描述

Torin 1是一种有效的mTORC1/2抑制剂，在无细胞试验中IC50为2nM/10nM；作用于mTOR比作用于PI3K选择性高1000倍。

信号通路

PI3K/Akt/mTOR

靶点

mTORC1

mTOR

DNA-PK

mTORC2

p110γ

IC50

2nM

4.32nM

6.34nM

10nM

171nM

体外研究

Torin 1在2和10nM浓度下分别抑制mTORC1和mTORC2底物的磷酸化。此外，Torin 1对mTOR比对PI3K(EC50=1800nM)的选择性高1000倍，比对450种其它蛋白激酶的结合选择性高100倍。Torin 1通过耐rapamycin机制引起细胞周期阻滞，并且其不依赖于mTORC2。Torin 1比rapamycin更完全地干扰mTORC1依赖表现型。Cap依赖性翻译需要mTORC1耐Rapamycin的功能。在近期的一项研究中，据报道Torin 1通过活化人内分泌细胞系BON中MEK/ERK/c-Jun通路，能够增加神经降压素分泌和基因表达。

体内研究

Torin 1在20mg/kg剂量下，在U87MG异种移植模型中是有效的，并且在肿瘤和外周组织中对mTOR下游效应蛋白表现出良好的药效学抑制作用。

临床实验

N/A

特征

N/A

酶活性检测实验

方法

为产生可溶性mTORC1，HEK-293T细胞系，稳定表达N端FLAG标记的Raptor，使用水泡性口炎病毒G-假型病毒MSCV逆转录酶病毒产生。对于mTORC2，产生相似的HeLa细胞，能够稳定表达N端FLAG-标记的Protor-1。两个复合物通过在50mM HEPES(pH7.4)、10mM焦磷酸钠、10mM β-甘油磷酸钠、100mM NaCl、2mM EDTA、0.3% CHAPS中裂解细胞纯化。细胞在4℃下裂解30分钟，不溶解部分通过以13,000rpm微量离心10分钟移除。上清液与FLAG-M2单克隆抗体-琼脂糖培育1小时，然后用裂解缓冲液洗涤3次，用包含终浓度0.5M NaCl的裂解缓冲液洗涤1次。纯化的mTORC1用100μg/ml 3×FLAG多肽在50mM HEPES(pH7.4)、100mM NaCl中洗脱。将洗出液等分收集，储存在-80℃。纯化底物S6K1和Akt1。激酶试验在30℃，由激酶缓冲液(25mM HEPES(pH7.4)、50mM KCl、10mM MgCl2、500μM ATP)和150ng灭活的S6K1或Akt1底物组成的20μl终体积混合物中进行。反应通过加入80μl样品缓冲液停止，并沸煮5分钟。随后，样品通过SDS-PAGE和免疫印迹法分析。

细胞实验

细胞系

MEFs

浓度

~250nM

处理时间

4天

方法

细胞活性通过CellTiter-Glo发光法细胞活性测定评估。在第0天，细胞以500细胞每孔接种到96孔板，并生长过夜。第1天，细胞用适当的化合物处理，随后在第3-5天分析。对于分析，板在室温下培育60分钟，将50μl CellTiter-Glo试剂加入每孔中，板在定轨摇床上混合12分钟。发光在标准平板光度计上定量。

动物实验

动物模型

U87MG异种移植物模型

配制

Torin 1粉末首先以25mg/ml在100% N-甲基-2-吡咯烷酮中溶解，随后以1:4与无菌50% PEG400稀释到5mg/ml的终浓度

剂量

20mg/kg

给药方式

腹腔注射给药，每天一次

产品编号

产品名称

包装

SC0245-10mM

Torin 1 (mTOR抑制剂)

10mM×0.2ml

SC0245-5mg

Torin 1 (mTOR抑制剂)

5mg

SC0245-25mg

Torin 1 (mTOR抑制剂)

25mg

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说明书

1份