TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)

      碧云天生产的显色法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
      细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
      本试剂盒有如下优点。(1)高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有 DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。(2)特异性好：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。(3)快速：仅需约2-3个小时即可完成。(4)应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。(5) 实测效果好：参考图1。

      图1. 本试剂盒的检测效果图。A. HeLa细胞未处理或用DNase I室温孵育10分钟后的检测效果图。B. Hela细胞未处理或用10μM喜树碱(Camptothecin)处理24小时后的检测效果图。图中棕褐色为DAB染色阳性细胞。本图中的染色实验均在12孔板中进行。本图仅作参考，不同的样品不同的检测条件，实际获得的结果可能和上图有较明显的差别。

      TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的非凋亡细胞判断为凋亡细胞。
      极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，同时检测多个凋亡指标。
      本试剂盒足够检测50个样品。 

保存条件：
      -20℃保存，DAB显色液A和DAB显色液B需避光保存。
注意事项：
      需自备用于洗涤细胞的PBS或HBSS，用于封片的抗荧光淬灭封片液(P0126)等适当的封片液，用于固定的4%多聚甲醛或向碧云天订购免疫染色固定液(P0098)，同时需自备含0.3% Triton X-100的PBS或向碧云天订购免疫染色强力通透液(P0097)。需自备过氧化氢。
      如果用于石蜡切片的检测，需自备蛋白酶K和二甲苯。蛋白酶K(ST533)可以向碧云天订购。
      DAB对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。